水稻顺式还原酮加双氧酶基因的表达及功能分析.PDF

中国农业科学 2017,50(12):2199-2208 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2017.12.001 水稻顺式还原酮加双氧酶基因的表达及功能分析 熊炜，杨波，刘薇茵，王荃，孔晓聪，靳亚军，梁闪闪，栾维江，张泗举 （天津师范大学生命科学学院/天津市动植物抗性重点实验室，天津 300387 ） 摘要： 【目的】农作物对逆境胁迫的耐受能力与产量息息相关，是作物育种要考虑的重要因素。文中对 水稻顺式还原酮加双氧酶基因 OsARD1 进行研究，分析其表达模式，明确其在水稻应对非生物胁迫中的功能， 为水稻耐旱品种的分子设计及育种提供参考依据。【方法】提取不同组织器官的总 RNA，利用 RT-PCR 方法分 析 OsARD1 表达的组织特异性。利用不同的非生物胁迫处理 14 d 大小的野生型（中花 11）植株，在不同时间 点提取总 RNA，利用 RT-PCR 方法分析 OsARD1 表达的受诱导情况。通过农杆菌遗传转化法转化水稻愈伤组织， 经过一系列分子检测后获得稳定遗传的 T1 代 OsARD1 的过量表达转基因植株，以转入空载体的野生型植株作 为对照。将在营养液中正常培养的12 d大小的野生型和过表达幼苗移出营养液进行缺水处理并进行恢复试验。 将催芽后的野生型和过表达转基因植株种子种在含有 5% PEG6000 的 agar 培养基中进行渗透胁迫处理，以不 含 PEG6000 的 agar 培养基作为对照，观察二者的表型。【结果】组织特异性表达分析表明 OsARD1 主要在根 及成熟的组织中表达，尤其在衰老的组织中有较高表达。非生物胁迫处理表明 OsARD1 的表达明显受机械损伤、 高盐和渗透胁迫的诱导。获得 6 个独立株系的可稳定遗传的 OsARD1 过量表达转基因植株。对过量表达转基因 植株及空载体野生型对照进行干旱胁迫处理，缺水处理 5 h 后，野生型植株叶片卷曲皱缩成针状表现出严重 的缺水症状，但此时过表达转基因植株叶片仍处于舒展状态；缺水处理 8 h 后开始复水培养 3 d，野生型植 株的存活率仅为 10%，而过表达植株存活率为 80%，远远高于野生型，说明过量表达 OsARD1 提高了水稻对缺 水的耐受能力。用 PEG 渗透胁迫模拟干旱胁迫处理 6 d 后发现，不含 PEG6000 对照组中野生型和过表达植株 的幼苗生长情况没有明显的差别；在 PEG 处理组中，野生型幼苗根的生长受到严重抑制，而过表达植株幼苗 根的生长受到抑制较小，根长明显长于野生型对照植株，说明过量表达 OsARD1 增强了水稻耐受干旱胁迫的能 力。【结论】OsARD1 主要在水稻根及成熟的组织中表达，并且受机械损伤、高盐和渗透胁迫的诱导。过量表 达 OsARD1 提高了水稻抗旱性能。 关键词：水稻；OsARD1；过量表达；干旱胁迫；乙烯 Expression and Functional Analysis of Acireductone Dioxygenase Gene in Rice XIONG Wei, YANG Bo, LIU WeiYin, WANG Quan, KONG XiaoCong, JIN YaJun, LIANG ShanShan, LUAN WeiJiang, ZHANG SiJu (College of Life Science, Tianjin Normal University/Tianjin Key Laboratory of Animal and Plant Resistance, Tianjin 300387) Abstract: 【Objective 】 The tolerance to biotic/abiotic stress is highly associated with grain yield, which is a very important goal in crop breeding. The objective o