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黄柏显微定量研究 　　(1．辽宁中医药大学附属医院，辽宁沈阳110032；2．辽宁中医药大学，辽宁沈阳110032) 　　摘要：目的：利用显微定量法测定黄柏质量。方法：采用容量分析手段，测定黄柏粉末中的石细胞的显微特征数，并采用高效液相法对黄柏的指标成分盐酸小檗碱进行了含量测定；对得到的两组数据进行相关分析。结果：得到了黄柏药材的石细胞显微特征数及盐酸小檗碱含量；二者有显著的相关性。结论：利用显微定量法测定黄柏质量是科学、可行的。 　　关键词：显微定量法；黄柏；相关分析 　　中图分类号：R284　文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)05-0964-03 　　 　　显微定量法是利用药材自身的某种显微特征具有固定常数的特点，采用容量分析法测定药材含量的一种中药鉴定方法。上世纪70年代以来，已有学者对中药的显微定量法进行了初步研究，涉及到43味中药36味中成药，其研究结果都表明，利用显微定量法来检测中成药中药材的投料量是科学、可行的。该法所用仪器简单，试药易得，操作简便，对中成药中主药、贵重药和有毒药可从形态特征大体上判断其数量，在一定程度上可保证中成药的质量及用药的安全有效。但显微定量法研究尚属探索阶段，中成药生产、供应、使用等部门至今很少应用，尚需要进一步深入研究，以使该方法可以在基层检测中得到切实的开展和使用。本实验以常用皮类药材黄柏为研究对象，对显微定量法在中药研究中的应用进行了较系统的研究。 　　黄柏为芸香科植物黄皮树Phellodendron chinenseShneid.的干燥树皮。性寒，味苦，归肾、膀胱经。具有清热燥湿，泻火除蒸，解毒疗疮的功效。常用于湿热泻痢、黄疸、带下、热淋、骨蒸劳热、盗汗、遗精、疮疡肿毒、湿疹瘙痒。黄柏粉末绿黄色或黄色，纤维鲜黄色。直径16－38p,m，常成束，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维。石细胞鲜黄色，类圆形或纺锤形，直径35～128μm，有的呈分枝状，枝端锐尖，壁厚，层纹明显。 　　利用显微定量法对黄柏的专属性显微特征――石细胞，进行了显微定量分析，得到了黄柏石细胞的显微特征常数，并与黄柏指标成分小檗碱的含量测定结果进行了相关分析。 　　 　???1仪器与试剂(原料　药材) 　　 　　1.1仪器　XS－213生物显微镜；OLYMPUS System Bio-logic Microscope BX-50生物显微镜；OLYMPUS DP-10Camera；电子分析天平－岛津AY220；岛津LC-6A高效液相色谱仪；微量移液器(WKY型－球晶生化试剂仪器有限公司)。 　　1.2试剂　水合氯醛(沈阳沈一精细化学品有限公司批；甘油(沈阳市医药公司化玻站试剂分装厂2002年9月16日出品)；甲醇(色谱纯沈阳化学试剂厂批号200401011)；磷酸(分析纯天津市天河化学试剂厂批；盐酸小檗碱(中国生物药品检定所110713－200208)。 　　1.3药材所有实验样品经辽宁中医药大学鉴定教研室翟延君、李峰教授鉴定，均为正品黄柏。 　　 　　2方法与结果 　　 　　2.1显微定量法优化条件选择　考虑到影响样品混悬效果的因素主要有样品重量、样品的粉碎粒度、混悬剂的组成，并且各因素的考察水平有所不同，故本实验采用均匀设计法考察显微定量法的优化条件。实验采用U6(63)均匀设计表，具体实验安排见表2。 　　取2号来源样品，粉碎，分别过80和100目筛。精密称定100、200、300、400、500、600mg共6份，分别用水合氯醛试液多次水飞，并入25mL量瓶中，按均匀设计表加入相应甘油量，最后用水合氯醛试液定容。对上述6份混悬液，分别用微量移液器精取0.02mL进行显微装片，每份溶液平行制10片，于显微镜下观察石细胞并计数。以每份样品的变异系数为考察指标，通过均匀设计软件得出优化结果。 　　均匀设计软件给出的结果：Y=0.2163+0.0006×X1-0.0001×X1×X3×0.0002×X2×X3；RR=0.9999；F=1482.3591；Ymin=0.0729；A1-A2=600，80，17.5。 　　即优化条件为：样品称样量600mg左右，粉碎过80目筛，加入甘油17.5mL。对优化结果的验证实验结果见表4。验证结果中，各份样品的变异系数均与优化条件给出的最小变异系数(0.0729)接近，说明由均匀设计软件给出的优化条件是科学、准确的。 　　2.2黄柏药材中的水分测定　按2005版《中华人民共和国药典》附录4中烘干法，测定各样品含水量。 　　2.3黄柏各样品的显微特征常数测定　按照均匀设计得到的优化条件，取各样品(80目)，分别精密称定。各加17.5mL甘油，以水合氯醛试液多次水飞，分别定容于