ELISA法与胶体金免疫层析法检测乙肝表面抗原结果分析.docVIP

ELISA法与胶体金免疫层析法检测乙肝表面抗原结果分析 　　【摘要】目的：分别采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法和胶体金免疫层析（GICA）法检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg），对比结果，探讨两种方法检测乙肝表面抗原的应用价值。方法：分别采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法和胶体金免疫层析（GICA）法检测768份18～65岁人群血清标本，对比乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）检测结果。结果：胶体金免疫层析法检测出HBsAg阳性标本42份，阳性率5.47%。ELISA法检测出HBsAg阳性标本46份，阳性率为5.98%，两种方法阳性检出率差异无统计学意义（P0.05）。两种方法检测的符合率为97.39%。胶体金免疫层析法的灵敏度为69.57%，特异度为98.61%。结论：胶体金免疫层析法操作简便、快速，检测的特异度较高，但其灵敏度有限，有待提高。 　　【关键词】酶联免疫吸附试验法；胶体金免疫层析法；乙肝表面抗原 　　【中图分类号】R722.12 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2015）03-0225-01 　　乙型病毒性肝炎，简称乙肝，是一种由乙型肝炎病毒（HBV）感染机体后所引起的疾病，是当前严重危害人类身体健康的传染病。乙型病毒肝炎表面抗原（HBsAg）阳性是感染乙肝病毒的重要指标。酶联免疫吸附试验（ELISA）法是目前我国检测乙肝HBsAg最为普及的方法，应用时间较早，而胶体金免疫层析法是近年来采用的免疫学检测方法。本组研究资料采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法和胶体金免疫层析（GICA）法对768份18～65岁人群血清进行HBsAg检测，并对比检测结果。现报告如下： 　　1材料与方法 　　1.1标本来源 　　抽取18～65岁人群血清768份，采集无溶血、无脂浊的静脉血标本3～5ml，室温静置30min后，4000r?Mmin离心5min，充分分离血清待检。 　　1.2仪器与试剂 　　乙肝五项胶体金快速检测板由上海科华生物科技有限公司提供，HBsAg试纸条由蓝十字生物药业有限公司提供；ELISA检测试剂由珠海丽珠生物科技有限公司公司提供；TDL-42A低速离心机；Unto-FLiudo全自动酶标洗板机；Unto-2010酶标仪。 　　1.3方法 　　1.3.1胶体金免疫层析法 将GICA试纸条浸入待测标本，标本不可浸没标志线，浸入时间约为10分钟，根据对照线位置出现的红线条数判定结果。如对照线与检测线间位置出现1条红线为阴性，对照线与检测线间位置出现2条红线为阳性。 　　1.3.2酶联免疫吸附试验（ELISA）法 于相应孔中用加样器分别加入质控品、待检标本及阳性、阴性对照血清，并做好标记，然后往每个孔中加入酶标抗体，混匀，置于37°C条件下1h，严格按照说明书经洗版、添加底物，并在37°C条件下避光15min，加终止液停止反应。使用酶标仪检测OD值，并计算S?MCO值。若S?MCO≥1.0则表示实验结果为阳性，若S?MCO1.0则表示实验结果为阴性。 　　1.4统计学方法 　　采用SPSS 17.0统计软件分析，计数资料采用百分率表示，行χ2 检验，P0.05为差异有统计学意义。 　　2结果 　　两组方法检测HBsAg的阳性率比较：共检测768份血清标本， 两种方法检测HBsAg均阴性的712份，均阳性的32份，两种方法检测的符合率为97.39%。胶体金免疫层析法检测出HBsAg阳性标本42份，HBsAg阳性率5.47%（42?M768）。ELISA 法检测出HBsAg阳性标本46份，HBsAg阳性率为5.98%（46?M768），两种方法阳性检出率差异无统计学意义（P0.05）。根据特异度、灵敏度计算公式，灵敏度= A / （ A + C ）×100%；特异度= D/ （ B + D）×100%。A-真阳性数，B-假阳性数，C-假阴性数，D-真阴性数。得出：胶体金免疫层析法的灵敏度为69.57%，特异度为98.61%。 　　ELISA法和胶体金免疫层析法检测结果 　　胶体金免疫层析法 ELISA法 合计 阳性+ 阴性? 阳性+ 32 10 42阴性? 14 712 726合计 46 722 7683讨论 　　乙肝病毒性肝炎是严重危害人体健康的一种病毒性肝炎，由乙型肝炎病毒（HBV）感染引起，血液、性接触、日常生活接触和母-婴垂直传播是HBV传播的主要方式。1965年Biumberg等首次发现乙型肝炎病毒（HBV）的表面抗原（HBsAg），其现已成为HBV感染的重要标志，可作为乙肝病毒性肝炎的重要诊断依据。目前实验室检测乙肝HBsAg的方法有很多，如化学发光微粒子免疫分析法（CMIA）、荧光定量聚合酶链反应法（FQ-PCR）、酶联免疫吸附试验（ELISA）