ELISA法检测乙肝病毒抗HBc与抗HBe假阳性原因分析.docVIP

ELISA法检测乙肝病毒抗HBc与抗HBe假阳性原因分析 　　[摘要]目的：通过分析影响酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝病毒血清抗-HBe与抗-HBc出现假阳性的因素，旨在找出一些克服办法。方法：对采用酶联免疫吸附试验(ELISA)2次检测出的78例抗-HBc阳性和72例抗-HBe阳性的血清标本，用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)试剂进行复检，ELISA方法初检呈阳性反应而TRFIA复检为阴性者判为假阳性。结果：ELISA法检测出的78例抗-HBc阳性和72例抗-HBe阳性的血清标本，用TRFIA方法复检出-抗HBc阳性71例，抗-HBe阳性63例，以TRFIA方法为准，ELISA法检测乙肝病毒抗-HBc和抗-HBe假阳性率分别为8.97％和12.50％。结论：有多种影响因素可影响酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝病毒抗-HBc、抗-HBe出现假阳性，除了消除其影响因素外，对怀疑假阳性的标本，还应进一步采用更敏感的方法如时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)和化学发光等方法重新检测。 　　[关键词]酶联免疫吸附试验(ELISA)；时间分辨荧光免疫分析(TR，FIA)；抗-HBe；抗-HBc；假阳性 　　[中图分类号]R446.6　[文献标识码]C　[文章编号]1674-4721(2010)12(c)-082-02 　　 　　酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎五项指标从-20世纪80年代末开始在国内推广，因具有方法简便、准确率高而得以在国内临床实验室广泛应用，但是该方法也存在一些问题，特别是抗HBe、抗-HBc结果国内多有报道易出现假阳性，为分析ELISA法抗-HBe、抗-HBc出现假阳性的因素，以及找出一些克服办法，笔者用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)做了对比分析，现将两组方法检测结果以及评价分析报道如下，以供同行们参考。 　　 　　1　资料与方法 　　 　　1.1　标本来源 　　ELISA法检测出的抗-HBc阳性78例和抗-HBe阳性72例均来自本院2010年1-7月780例门诊和住院患者检测乙肝五项的血清标本。 　　 　　1.2　试剂和仪器 　　ELISA法试剂盒为上海科华生物技术有限公司产品，仪器采用瑞士帝肯RMP-150全自动酶免仪，抗-HBc、抗-HBe以抑制率50％判阳性。时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)采用上海新波时间分辨荧光免疫技术提供的仪器及配套试剂，抗HBc、抗-HBe以样本荧光速率值与临界荧光速率值之比(S／N)≤1.0判阳性。 　　 　　1.3　方法 　　抽取患者早晨空腹静脉血3-5ml人促凝分离胶密封试管内，37℃放置待凝固后，离心分离血清1-2h内开始检测。检测前严格按照上海科华试剂盒使用说明书将试剂盒在室温下平衡30min，对血清标本同时检测乙肝五项指标，将检-测出的抗Hbe、抗-HBc阳性的标本，再次用上海科华试剂盒复检，最后将2次检测均为阳性的血清标本，用上海新波提供的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)配套仪器及试剂进行复查，TRFIA法严格按说明书操作，质控曲线良好。 　　 　　2　结果 　　 　　780例患者的血清标本，首次用ELISA法试剂盒检测出抗HBc阳性81例和抗-HBe阳性74例，第二次用ELISA法试剂盒检测出抗-HBc阳性78例和抗-HBe阳性72例，抗一HBc和抗-HBe阳性符合率分别为96.30％(78／81)和97.30％(72／74)；用ELISA法2次检测均为阳性的抗-HBc 78例和抗HBe 72例血清标本。用TRFIA方法复检出抗-HBc阳性71例，抗HBe阳性63例，以TRFIA方法为准，ELISA法检测乙肝病毒抗HBc和抗-HBe假阳性率分别为8.97％(7／78)和12.50％(9／72)。 　　 　　3　讨论 　　 　　酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝病毒五项指标试剂盒经过国内20多年的临床应用，加上生产厂家的不断改进，目前临床实验室使用的试剂盒多为一步法，操作比最早使用的试剂盒要简单、方便得多，但也存在一些影响ELISA检测-结果的因素，比如标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长、标本凝固不全、试剂盒的抗原和酶结合物纯度低等都可导致假阳性结果翻，特别是抗HBe、抗-HBc采用竞争法，检测结果以不显色为阳性(其他三项相反)，更易出现假阳性。对于ELISA法检测抗-HBe、抗-HBc出现假阳性的解决途-径，本文参考了一些文献加上笔者的工作经验，认为除了要检查仪器性能及试剂盒本身质量问题外(有研究者建议采用不同厂家试剂盒复检，我们以前也用不同厂家试剂盒复检，但上海科华试剂盒较为稳定，本文2次检测抗HBc和抗一HBe阳性符合率分别为96.30％和97.30％，加上本文研究与TRF