阻断Rho-ROCK信号传导通路治疗大鼠脊髓损伤的实验研究演示文稿.ppt

实验结果 组别 3天 1周 2周 3周 4周 A组 B组 C组 0.42±0.07 0.95±0.03 0.46±0.03 0.41±0.06 1.09±0.04 0.48±0.06 0.42±0.05 0.93±0.02 0.47±0.02 0.41±0.05 0.91±0.05 0.44±0.05 0.41±0.04 0.89±0.03 0.43±0.03 各组动物RhoA mRNA的表达 （ ±s，n＝7） 注：C组与B组比较P＜0.05，C组与A组比较P＞0.05，B组与A组比较P＜0.05 实验结果 HE染色 A组为正常脊髓组织。B组脊髓组织水肿， 结构紊乱，有较多空洞形成，残存神经元较 少，炎症细胞浸润明显，大量胶质细胞增生。C 组脊髓组织水肿较B组轻，空洞数目较少，残存 神经元较多，炎症细胞浸润较轻，胶质细胞增 生明显少于B组。 实验结果 B组脊髓结构紊乱有较多空洞形成，残存神经元较少，炎症细胞浸润明显 实验结果 C组脊髓较B组空洞数目较少，残存神经元较多，炎症细胞浸润较轻 实验结果 NF免疫荧光染色 A组NF免疫荧光染色反应出正常脊髓组织轴 突的走行及分布。B组NF密度低排列杂乱无序， 未见有NF阳性纤维伸入损伤形成的空洞区。C组 神经纤维密度高，形状不规则，分布杂乱，部 分纤维穿过脊髓横断部位向尾端延伸。 实验结果 B组NF密度低排列杂乱无序，未见有NF阳性纤维伸入损伤形成的空洞区 实验结果 C组神经纤维密度高，形状不规则，部分纤维穿过脊髓横断部位向尾端延伸 讨 论 成年哺乳动物脊髓损伤后轴突难以再生的 一个重要原因是在局部环境中存在一些生长抑 制因子，可以抑制轴突的再生，主要包括三种 来源于髓鞘的抑制蛋白：髓鞘相关糖蛋白、 Nogo、少突胶质细胞髓鞘糖蛋白。这些抑制因 子有共同的信号传导通路，激活其下游的Rho而 引起生长锥塌陷，抑制轴突的再生。 讨 论 Rho具有GTP酶活性，在非活性GTP结合形式 和活性GTP结合形式之间循环，在细胞的信号转 导通路中作为信号转换器或分子开关，作用于 细胞骨架或其靶蛋白而产生多种生物效应，与 细胞骨架肌动蛋白的结构改变有关，同时与细 胞形态、极性、细胞黏附、转移、信号转导和 细胞凋亡等多种生物行为有密切关系。 讨 论 Rho被多种外界刺激信号活化后，从GDP结 合的失活状态转变为GTP结合的活化状态，Rho 与ROCK结合，活化的Rho将信号传递给ROCK。肌 球蛋白磷酸酶是ROCK的底物，接受Rho-ROCK的 活化信号发生磷酸化，而使其自身失活，失活 的肌球蛋白磷酸酶不能将肌球蛋白轻链(MLC)脱 磷酸化，使得细胞浆内磷酸化MLC水平提升，肌 动-肌球蛋白交联增加，从而促进肌动蛋白微丝 骨架的聚合，影响肌动-球蛋白系统而导致生长 锥塌陷。 讨 论 讨 论 讨 论 在本实验中，Fasudil为ROCK抑制剂，其与 ATP竞争ROCK催化区的ATP结合位点，从而通过 竞争性拮抗作用阻断了ROCK的活性，阻断Rho- ROCK信号通路，实验组RhoA mRNA表达水平与对 照组比较显著降低，实验组动物的后肢运动功 能BBB评分明显高于对照组，说明阻断Rho-ROCK 信号通路后，灭活了Rho被激活后导致生长锥塌 陷而抑制轴突再生的作用。 讨 论 HE染色和NF免疫组化检查也证实了轴突的 再生，大鼠脊髓损伤后运动功能有明显的恢复。 但与空白组比较，后肢运动功能BBB评分仍有较 大差异，是由于脊髓损伤后影响轴突再生的因 素较多，单独的治疗手段不足以修复损伤的脊 髓，只能起到促进损伤修复的作用，联合应用 一些治疗手段能更好的促进轴突再生和功能的 恢复。 结 论 Myelin可以活化Rho，活化的Rho将信号传 递给ROCK，介导其下游一系列磷酸化、脱磷酸 化反应，而导致生长锥塌陷，抑制神经元轴突 的生长。 Fasudil可以阻断Rho-ROCK信号传导通路， 灭活了Rho被激活后导致生长锥塌陷而抑制神经 元轴突再生的作用，克服了Myelin对神经元轴 突再生的抑制作用，可以促进神经元轴突在抑 制性底物上再生。 结 论 阻断Rho-ROCK信号传导通路能较好地促进 大鼠脊髓损伤后轴突的再生及损伤脊髓运动和 传导功能的恢复。但是单独的治疗手段不足以 修复损伤的脊髓，只能起到促进损伤修复的作 用，联合应用一些治疗手段能更好的促进轴突 再生和功能的恢复。 致 谢 本课题是在尊敬的导师毕郑钢教授指导下 完成的，对老师致以由衷的感谢。感谢老师对 我无私的教诲和悉心的培养，感