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高皂苷人参株系早期筛选研究 　　[摘要] 通过PCR引物检测人参DNA特异性片段，快速、准确的评价低龄人参种质质量，加快人参育种进程。该研究基于个体之间的基因差异，设计7对引物，通过比对不同人参DNA的扩增图谱与皂苷含量相关性，成功得到一对特异性引物GC1，并采用L16（45）正交试验优化其25 μL PCR体系，各组分最佳配比为：DNA 2.60 mg?L-1，Mg2+ 1.44 mmol?L-1，dNTP 0.19 mmol?L-1，引物0.32 μmol?L-1，Taq 0.076 U?μL-1。对GC1引物进行验证，在24株供试人参中有2株扩增出1 200 bp特异性条带阳性样品，2株阳性样品中9种单体皂苷及其加和值含量均较高。该特异性条带序列与甘油-3-磷酸脱氢酶同源性达99%。GC1可以作为一种高皂苷人参株系早期筛选鉴定方法的特异性引物，有利于加快人参育种进程。 　　[关键词] 人参育种； PCR； 引物筛选； 体系优化 　　[Abstract] The study aims at screening the specific bands by PCR， quickly and accurately evaluating the quality of ginseng seeding， accelerating the process of ginseng breeding. Based on the correlation of genetic differences and saponin content between individuals， a pair of specific primer GC1 was screened by PCR. According to the experiment by L16 （45） orthogonal test， a PCR system most suitable for GC1 was established， which came out total 25 μL reaction system containing DNA 2.60 mg?L-1， Mg2+ 1.44 mmol?L-1， dNTP 0.19 mmol?L-1， primer 0.32 μmol?L-1and Taq enzyme concentration 0.076 U?μL-1. By comparing the saponin content and the GC1 PCR electrophoretogram of samples， the ginseng， with 1 200 bp specific band by PCR of GC1， the contents of 9 monosodium saponins and their additions were higher than others， which provided a reliable method for accelerating the process of ginseng breeding. The sequence was sequenced and 99% homologous to glycerol-3-phosphate dehydrogenase. 　　[Key words] ginseng breeding； PCR； primer screening； system optimization 　　人参皂苷具有多种生理、药理功能，其含量是衡量人参品质、培育新品种的重要指标之一。但其含量很低，稀有皂苷含量更低，而且尚未实现全化学合成，严重限制了人参的开发和应用。长久以来，培育高皂苷含量的新人参品种，是解决该问题的有效途径，然而由于人参世代间隔长的原因，传统的人参育种方法存在周期长，人力、物力消耗大等不足。本研究在前期的研究基础之上，筛选高皂苷株系的特异性引物，优化PCR体系，通过检测人参特异性DNA片段的有无，从而快速、准确的评价低龄人参种质质量，为建立人参优良品种早期筛选先进方法提供依据，从而加快育种进程。 　　1 材料 　　2016年9月中旬，于吉林农业大学药植园随机采取48株四年生种植人参，样品所处环境和管理条件均相同，24株用于特异基因筛选方法建立，24株用于特异基因筛选方法验证。 　　植物基因组DNA提取试剂盒、琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒均购自Tiangen公司；PCR试剂均购自Takara公司；乙腈、甲醇均为色谱纯；水为去离子水；其余试剂为分析纯。 　　Infinite M200PRO连续波长多功能酶标仪、安捷伦Sure Cycler 8800梯度PCR仪、电泳仪DYY