臭椿甲醇提取物化学成分与生物活性初步研究.docVIP

臭椿甲醇提取物化学成分与生物活性初步研究 　　摘要采用甲醇冷浸法进行提取及浓缩，从臭椿中分离到提取物，并进行了化学成分的初步分析和生物活性测定。根据化学分析初步推断，臭椿叶提取液里含有生物碱、蒽醌类化合物、有机酸或酚类化合物和鞣质、糖类、多糖和甙类；但不含有羟基香豆素、香豆素化合物、氨基酸、多肽或蛋白质、黄酮类成分。臭椿提取物对杂草水芹种子的发芽具有明显的抑制作用。 　　关键词臭椿提取物；化学成分；生物活性 　　中图分类号 O658 文献标识码A文章编号 1007-5739（2009）04-0011-02 　　 　　我国对臭椿提取物的研究，主要集中于臭椿提取物对光肩星天牛取食、产卵的驱避作用，但在植物化感和除草活性方面的研究尚未见报道。本文主要采用甲醇冷浸法进行提取及浓缩得到臭椿提取物，进行化学成分初步分析和生物测定，为下一步分离、纯化和应用提供参考。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1臭椿提取物的制备方法 　　准确称取臭椿叶粉碎干粉30g，分为3份（每份10g），分别用10倍体积的甲醇于室温下浸泡72h后抽滤，残渣再加溶剂浸泡，连续浸提3次，合并滤液，在旋转蒸发器内减压浓缩至稠膏状。将膏状物用甲醇溶解稀释定容到50mL，然后分别装入磨口棕色广口瓶密封，置于-4℃冰箱中备用。 　　1.2臭椿提取物组分的化学初步分析 　　采用液-液分配法（图1）对臭椿提取物进行初步分离，量取15mL提取物，加入约10倍体积的蒸馏水溶解样品，再于分液漏斗中分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取。选取活性物质层――水部，对水部进行化学成分预试验分析。 　　 　　1.3 臭椿提取物的生物活性测定 　　试验设5个处理，即原液（1X）、稀释2倍（2X）、5倍（5X）、10倍（10X）和对照（CK）。具体测定方法：在放有2层滤纸的洁净9cm培养皿中，加入10mL不同浓度的提取物，待有机溶剂甲醇挥发后，加入10mL蒸馏水，均匀摆放30粒饱满的待测水芹种子，对照组用10mL蒸馏水，同样每个处理30粒水芹种子，重复3次，然后放入25℃的培养箱萌发。 　　 　　2结果与分析 　　 　　2.1臭椿提取物的化学成分分析 　　（1）糖类、多糖和甙类。采用α-萘酚试验法。取上述水萃取液1mL，加入10% α-萘酚乙醇试剂2~3滴振摇后，倾斜试管，沿管壁缓缓加入0.5 mL浓硫酸，使分2层。在2层交界面出现清晰的紫色光环，表明含有糖类、多糖和甙类。 　　（2）酚类和鞣质。采用三氯化铁试验方法。取上述水萃取液1mL，加醋酸酸化后，加1%的三氯化铁试剂数滴，溶液呈现蓝绿和蓝黑色之间，表明含有酚类和鞣质。 　　（3）有机酸类。①pH试纸试验。取上述水萃取液，以pH试纸检查，pH值为4，呈酸性，表明含有有机酸或酚类化合物。②溴酚蓝试验。取上述水萃取液点于滤纸片上，喷洒0.1%溴酚蓝的70%乙醇溶液，在蓝色背景上立即显黄色斑点，表明含有机酸。 　　（4）黄酮类。采用三氯化铝试验方法。取上述水萃取液点于滤纸片上，喷雾三氯化铝试剂，干燥后，没有呈现黄色斑点，并与紫外灯下观察，没有明显荧光，表明没有黄酮类成分。 　　（5）蒽醌类。采用碱液试验方法。取上述水萃取液1mL，加10%苛性碱试剂呈红色，再加酸，使呈酸性，则红色褪去，表明含有蒽醌类化合物。 　　（6）生物碱类。采用硅钨酸试验方法。取上述水萃取液1mL，滴加几滴盐酸，再加硅钨酸试剂2~3滴，可以看到产生黄色沉淀并有少部分结晶，表明含有生物碱。 　　（7）香豆素类。①荧光试验方法。取上述水萃取液点于滤纸片上，干燥后置于紫外灯下观察，可以清晰地看见蓝――绿色荧光，再喷雾1%氢氧化钾试剂，荧光加强，表明不含有香豆素化合物。②三氯化铁反应。取上述水萃取液1mL，加三氯化铁2~3滴，试剂不变色，表明不含有羟基香豆素。 　　（8）氨基酸、多肽与蛋白质。采用茚三酮试验法。取上述水萃取液1mL，加0.2%茚三酮乙醇试剂2~3滴，摇匀，在沸水浴中加热数分钟，冷却后溶液呈无色，表明不含有氨基酸、多肽或蛋白质。 　　2.2臭椿提取物对杂草水芹种子发芽率的影响 　　由图2可以看出，水芹种子的发芽率随着臭椿提取物浓度的降低而呈上升趋势，其原液、2倍液、5倍液、10倍液发芽率分别为：0%、0%、0%、13.8%，与空白对照（CK）发芽率50.6%比较，表现出明显的受抑制作用。 　　 　　 　　3结论与讨论 　　 　　（1）采用甲醇冷浸法进行分离、提取、纯化及浓缩能够得到臭椿提取产物。根据化学分析初步推断，臭椿叶提取液里含有生物碱、蒽醌类化合物、有机酸或酚类化合物和鞣质、糖类、多糖和甙类；但不含有羟基香豆素、香豆素化合物、氨基酸、多肽或蛋白质、黄酮类成分。 　　（2）臭椿提取物对杂