当归有效成分HPLC与HPLCMS比较分析.docVIP

当归有效成分HPLC与HPLCMS比较分析 　　【摘要】目的：研究中草药当归[Angelica sinensis (Oliv.) Diels ]的有效成分。方法：采取液质联用技术HPLC/MS/MS 对当归提取液分别进行比较分析。结果：当归头身尾各部位的主要成分基本相同，成分含量具有一定差异，当归头以及当归身中的主要成分含量与归尾比较含量较高。结论：本方法对于定性和定量的控制当归中有效成分的含量研究具有一定的借鉴意义。 　　【关键词】当归；HPLC；分析 　　 　　药材当归[Angelica Sinensis Oliv. Diels]为伞形科多年生草本植物当归的根，头部庞大，顶圆平，中部稍凹，有茎的残痕，四周有不显著的细密环状皱纹身部为主根，粗而短，略呈圆柱状，质坚实，多有纵皱，其下部生出多个支根约为47个或更多细长而屈曲，上粗下细，有不规则的纵皱与短痕，质柔软全体外表黄褐色，自中心有放射状纹散出，其油润，具有特异的芳香。当归味甘、辛、温。归肝、心、脾经、补血、活血、调经止痛、润燥滑肠。主治月经不调、经闭腹痛、崩漏、血虚头痛、眩晕、痿痹、肠燥便难、赤痢后重痈疽疮疡、跌打损伤、风湿痹痈等。[5] 　　1HPLC当归分离比较 　　经过数十年的研究和实践，高效液相色谱HPLC技术已经成为一种非常有效和常用的植物药分析方法。近年来随着分析柱、高选择性和高灵敏度医疗检测器的普及，植物药分析领域获得了极大的推进。 　　1.1试剂及仪器乙醇 AR 99.7%；甲醇 AR 99.5%；中国重庆银河试验仪器有限公司生产的烘箱；Shanghai Branson生产的超声仪 SB3200；上海天美科学仪器有限公司生产的UV-VIS 紫外可见光谱仪；安捷伦公司生产的Agilent 1100 高效液相色谱仪。 　　1.2样品的制备将当归切样品成2-3cm片，晒干后粉碎并过筛。分别精确称取样品当归头、身、尾，各精确称取1.000 克，放入100ml的三颈烧瓶中，经水浴中后，分三次采用乙醇提取，首次加入25ml乙醇，在水浴中加热回流2.5h 后，将上层提取液小心倾倒出。再加入20ml乙醇继续加热2h。再将上层提取液小心倾倒出。再重复提取一次，最后获得当归乙醇提取液60ml。 　　1.3 结果归头、归身、归尾的紫外251nm液相谱图比较 　　从上图我们可以得出这样的结论。即归头、身、尾液相谱图中的四个主要色谱峰保留时间以及峰形都基本相同 分别为1.4min、2.1min、19.5min、25.7min左右。然而其各部分成分的含量存在一定的差异。在1.4min 左右峰的强度，当归头以及当归身基本一致。但二者均比归尾在19.4min处的峰强度要高，而当归身也高于当归头。当归尾也亦大于当归头在 25.7min 左右峰的强度。可明显发现当归头高于当归身，而当归身则高于当归尾，通过上图可以说明当归身以及当归头中的极性成分含量基本相当、当归头中的极性较弱的成分要高于当归身以及当归尾，出当归头以及当归身中，绝大多数成分的含量全部高于当归尾。 　　2RP-HPLC 当归分离比较 　　高效液相色谱和质谱技术是也是目前一种非常重要的分离以及鉴定方法，液相色谱-质谱的联用 HPLC-MS分析技术是上世纪70年代发展起来的一种依托MS检测手段的一种色谱技术，其集HPLC的高分离能力以及MS的高灵敏度极强的定性特性于一身。是当前比较公认的以活性物质为导向的分离提取，化学筛选以及对有潜在活性的新型化合物进行检测分析的一种理想手段。[3] 　　2.1试剂及仪器乙醇 AR 99.7%；甲醇 AR 99.5%；中国重庆银河试验仪器有限公司生产的烘箱；WATERS 公司生产的WATERS 2690色谱仪、WATERS 996检测器、WATERS Platform ZMD4000质谱仪；安捷伦公司生产的ZORBAXODSC-185μm 4.6X150mm分析柱。 　　2.2样品的制备直接采用1.2制得的样品。 　　2.3结果当归 251nm 紫外色谱图 　　在1.5min左右在质谱检测器上有较强的响应值，能够作出如下推断：在1.5min 左右的色谱峰对应可能含有有机酸如阿魏酸、棕榈酸一类的物质。 　　3 讨论 　　采用 HPLC 对当归的头、身、尾的提取液进行了比较。从液相谱图中可以看出，当归身以及当归头中的极性成分含量基本相当、当归头中的极性较弱的成分要高于当归身以及当归尾，出当归头以及当归身中，绝大多数成分的含量全部高于当归尾。 　　在1.5min左右在质谱检测器上有较强的响应值，可以推断在1.5min 左右的色谱峰对应或许含有有机酸如阿魏酸、棕榈酸一类的物质。 　　本研究只对当归提取液进行了定性的研究，并未进行定量的研究，对于液质联用分析，需要进行