动脉粥样硬化易损斑块破裂炎症靶点探索与抗炎干预研究-心血管内科学专业论文.docxVIP

第一部分 他汀通过调控趋化因子和趋化因子受体 发挥抗炎与稳定斑块的作用 目的 理想的动物疾病模型须对在人类治疗有效的药物具备一致的反应性。他汀类 药物通过抗炎和稳定斑块发挥心血管保护作用，我们观察阿托伐他汀（10mg/kg/day） 在不影响血脂水平的情况下对 R+C 模型易损斑块的影响。并深入研究他汀稳定斑块 作用的抗炎机制。 方法 8-10 周龄雌性 ApoE-/-小鼠共 30 只，应用 R+C 的造模方法诱导颈动脉易损斑 块 形 成 ， 所 有 小 鼠 随 机 分 为 两 组 ： 对 照 组 （ 给 予 生 理 盐 水 ） 和 阿 托 伐 他 汀 组 （10mg/Kg.d），每日灌胃给药，持续 8 周后取材，制作左颈总动脉病理切片分析阿 托伐他汀对斑块面积、斑块形态，斑块成份、胶原酶活性以及趋化因子表达水平的 影响；流式细胞法分析他汀对小鼠外周血单核细胞趋化因子受体表达；分离血浆检 测两组血脂水平及炎症因子水平。 结果 (1) 与对照组相比，阿托伐他汀组易损斑块检出率明显减少，但对斑块负荷无 影响；(2) 阿托伐他汀明显减少巨噬细胞浸润以及脂质在内膜下沉积，并增加斑块中 胶原蛋白含量、降低胶原蛋白酶活性和基质金属蛋白酶（MMPs）表达；(3) 阿托伐 他汀下调斑块中趋化因子 MCP-1，CX3CL1 表达以及外周血单核细胞表面趋化因子 受体 CCR2、CX3CR1 的表达；(4) 血浆炎症标志物 hs-CRP 和 TNF-α 在阿托伐他汀 组小鼠明显降低，两组小鼠总胆固醇、甘油三酯水平无差异。 结论 (1) R+C 模型在阿托伐他汀干预下，斑块趋于稳定并且炎症水平下调；R+C 模 型是一个较为理想的研究动脉粥样硬化易损斑块破裂机制与治疗手段的模式动物平 台。 (2) 他汀可通过调控趋化因子及其受体表达减轻巨噬细胞在粥样硬化斑块内浸 润从而发挥心血管保护作用。 关键词 动脉粥样硬化，易损斑块，阿托伐他汀，巨噬细胞，趋化因子/受体 II 第二部分 核受体 Nur77 在动脉粥样硬化发生发展 中的作用及机制研究 目的 核受体 Nur77 是一种在动脉粥样硬化中起重要调控作用的转录因子。近几年 发现 Nur77 在某些病理生理状态下发生核浆穿梭，在细胞浆发挥重要的“非转录依 赖型功能”。 本部分探讨在不同炎症状态的 AS 病变中 Nur77 在巨噬细胞中的定位， 明确 Nur77 核浆定位与炎症的关系；并利用 Nur77 基因敲除小鼠观察其对动脉粥样 硬化发生发展尤其是斑块稳定性的影响。 方法 分别在不同炎症程度的动脉粥样硬化斑块中行 Nur77 和巨噬细胞免疫荧光共 染，明确 Nur77 核浆定位与炎症程度的关系。选取同窝 Nur77+/+ApoE-/- （ApoE 组） 与 Nur77-/-ApoE-/-（DKO 组）小鼠，行 R+C 造模，分别于 1W、2W、6W、8W 颈动 脉取材，制作病理切片。分析两组在不同病变阶段斑块面积，斑块表型，斑块成份 的差异。 结果 (1) 在人和小鼠动脉粥样硬化病变中都证明：在早期阶段，炎症程度较轻， Nur77 定位于核内，而在炎症活跃的易损斑块，Nur77 大量出核。这提示 Nur77 出核 与炎症加剧密切相关。(2) 应用基因敲除小鼠对 Nur77 的作用进行在体研究，发现在 斑块早期阶段（1w+2w 取材组），两组间斑块面积、斑块形态分析都没有差异。而在 斑块急速进展成易损斑块并伴有高比例斑块破裂的 6w+8w 组，Nur77 敲除后不稳定 斑块，斑块出血，斑块破裂，斑块破裂伴腔内血栓的比例显著下降，斑块趋于稳定， 斑块负荷显著减小。(3) 对两组晚期病变进行斑块成份分析，发现 Nur77 敲除后平滑 肌细胞显著增加，胶原酶表达显著减少，胶原含量增加。此外，巨噬细胞和斑块脂 质含量都有下降的趋势。 结论 (1) 动脉粥样硬化斑块巨噬细胞中 Nur77 的胞浆定位与炎症程度加剧密切相 关；(2) Nur77 胞浆定位促使斑块易损性显著增加以及斑块破裂的发生，是一个很好 的稳定斑块的抗炎干预靶点。 III 关键词 动脉粥样硬化，易损斑块，Nur77，亚细胞定位，抗炎靶点 第三部分 RXRα 拮抗剂 K-80003 的抗炎与稳定斑块作用研究 目的 RXRα 在动脉粥样硬化发生进展中发挥重要的调控作用，经特殊修饰的舒林 酸衍生物 K-80003 无 COX 抑制效应而具有对 RXRα 的高度亲和力。本部分探讨 RXRα 拮抗剂 K-80003 对动脉粥样硬化尤其是斑块稳定性的影响，并评价其抗炎效应及安 全性，明确其临床应用价值。 方法 8-10 周龄雌性 ApoE-/-小鼠 R+C 方法造模诱导颈动脉易损斑块形成，所有小鼠 随机分为两组：对照组和 K-80003 组（15mg/Kg.