香橙苹果酸脱氢酶CjMDH基因表达特性及转基因烟草的耐铝性分析.PDF

园　艺 　学 　报 　2008, 35 ( 12) : 1751 - 1758 A cta Horticu lturae Sin ica 香橙苹果酸脱氢酶 Cj M D H 基因表达特性及转基因 烟草的耐铝性分析 张 　觅 , 罗小英 , 白文钦 , 李怡然 , 侯 　磊 , 裴 　炎 , 李忠旺 , 李德谋 (西南大学生物技术中心 , 农业部生物技术与作物品质改良重点开放实验室 , 重庆市农业生物技术重点实验室 , 重庆 4007 15) 摘 　要 : 为研究柑橘砧木香橙对酸性土壤的适应机理 , 从 ‘资阳香橙 ’根 cDNA 文库中随机测序克隆 了苹果酸脱氢酶基因 CjM D H ( GenB ank acce ssion No. AB I75147) 。该基因 cDNA 序列长 1 368 bp , 其开放阅 读框为 1 239 bp , 推测其编码 4 12个氨基酸残基 , 在编码氨基酸序列中存在 1个苹果酸脱氢酶的 NAD 结合 位点和 8个苹果酸结合位点 , iPSOR T分析表明该基因编码氨基酸序列 N 端存在叶绿体转移肽 。同源性分析 显示 CjMDH 与拟南芥 、烟草 、大豆 、豌豆 、水稻 、苜蓿等植物的 MDH 一致性约为 80% , 相似性在 85%以 上 。在与苹果酸脱氢酶功能有关的 NAD 和苹果酸结合位点处氨基酸残基高度保守 , 表明这两个区域是 MDH 重要的功能区。Northern b lot和 R ealtim e R TPCR 分析结果表明该基因在香橙根和叶中优势表达 , 在 根中表达量最高 , 茎中表达最低 。将 CjM DH 基因构建到组成性启动子 CaMV 35S驱动的载体中 , 对烟草进 行转化 , 从转基因烟草株系中筛选获得了 3个 CjM DH 基因高表达的株系 。将表达量高的转基因株系进行耐 铝试验 , 初步结果表明在烟草中超量表达 CjM DH 可以提高植株对铝毒的耐受能力 。 关键词 : 橙 ; 苹果酸脱氢酶基因; 表达特性 ; 转基因烟草 ; 耐铝分析 中图分类号 : S 6664　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 0513353X (2008) 12 175108 Character iza tion of M a la te D ehydrogena se Gene from C itru s ju n os and Its Tran sgen ic Tobaccos Tolerance to A lum in ium Tox ic ity ZHAN G M i, LUO X iaoying , BA IW enq in , L I Yiran , HOU L ei, PE I Yan , L I Zhongwang, and L I D emou ( Key L abora tory of B iotechnology and C rop Q ua lity Imp rovem en t of M in is try of A g ricu ltu re of Ch ina, B iotechnology R esea rch Cen ter, S ou thw es t Un ivers ity, Chong qing 4007 15, Ch ina) A b stract: M alate, ub iqu itou sly existi