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无子刺梨组织培养与快速繁殖技术研究 　　摘要：以无子刺梨（Rosa sterilis）去叶片及皮刺的健壮枝条为外植体，通过对从诱导到组培苗生根各步的反复试验，摸索总结出无子刺梨组织培养和快速繁殖各步的最佳配方。结果表明，最佳初代诱导培养基为LM+1.0 mg/L KT+0.5 mg/L BA+0.02 mg/L TDZ+0.05 mg/L NAA ；最佳增殖培养基为LM+1.0 mg/L KT+1.0 mg/L BA+0.02 mg/L TDZ +0.05 mg/L NAA；最佳生根培养基为LM+0.1 mg/L NAA。 　　关键词：无子刺梨（Rosa sterilis）；植物组织培养；快速繁殖 　　中图分类号：S661.2；Q943.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）17-4321-03 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.17.056 　　刺梨（Rosa sterilis） 为蔷薇科蔷薇属植物，又名缫丝花，在中国主要分布在贵州、云南、四川、湖北、陕西等省，经引种栽培，山西、山东、河南、安徽等省也有分布[1]。刺梨具有喜阳耐旱、耐瘠薄等特性[2]。刺梨果实营养非常丰富，据测定，100 g鲜果含水分81 g、蛋白质0.7 g、碳水化合物13 g、钙0.07 g、维生素D 2.8 g、维生素C 2.5 g。刺梨除鲜食外，还可以加工成果汁、果酒、饮料、果脯和果酱等各种食品，是老少皆宜的营养品[3]。刺梨以根和果实入药，据《本草纲目拾遗》记载，刺梨具有消食健脾、收敛等功效。刺梨不仅富含维生素C、鞣酸及相关的多酚类物质[4，5]，近年还发现刺梨富含超氧化物歧化酶（SOD）、多糖（PRRT）以及多种微量元素等，这些成分具有清除体内自由基、降低脂质过氧化物（Lipid peroxide，LPO）、减少脂褐素、增强免疫功能、防止动脉粥样硬化、抗细胞突变作用，并能防止非胆碱能（Non adronergic non cholinergic，NNC）在体内的形成及致癌作用[1]。 　　无子刺梨为贵州植物园1985年发表的一个刺梨新种。其成熟果实暗橙黄色，果面皮刺基本脱落，种子败育，故名无子刺梨。无子刺梨生长快，根系发达，适宜山地造林，是退耕还林等工程造林的优选品种之一[6]。无子刺梨栽植3年开始挂果，果实味清香爽口，酸甜适度，鲜食加工均宜，被誉为“新山珍”[7]。其鲜果的VC含量达1 133 mg/100 g，相比于有子刺梨，其单宁含量较低，果实所含的糖分、超氧化物歧化酶和维生素均较高，可溶性固形物达18%，并含有B、Zn、Mo、Cu、Fe等多种矿物质元素，品质更加优异，具有较高的经济价值[8]。但由于无子刺梨属野生资源，分布范围窄，资源较少，加上没有种子，所以自然繁殖较慢[9，10]。为此，有必要发挥组织培养快速繁殖的技术特点，建立起一套完整成熟的组织培养工序，从而实现无子刺梨的快速推广种植。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　无子刺梨采自西南林业大学树木园无子刺梨扦插基地。用枝剪剪取叶面无病虫害痕迹的健壮枝条，脱去茎杆上所有叶片及皮刺，再用刷子蘸取浓洗衣粉水刷洗枝条表面，再用流水冲洗干净枝条上的洗衣粉水。 　　1.2 外植体消毒及初代培养 　　将外植体剪成带有一个腋芽的小段，在超净工作台内用75%酒精浸泡1 min后转入升汞中浸泡10 min和13 min，再用无菌水漂洗3遍转接入诱导培养基中，27 d后统计结果。培养基为LM培养基加上KT、BA、TDZ、NAA这4种植物激素。针对这4种激素，设计4因素3水平的L9（34）正交试验，因素与水平见表1。蔗糖与卡拉胶添加量分别为30 g/L和5 g/L。参照无子刺梨原产地生境，在光照度为1 500 lx，温度22 ℃的培养条件下培养观察。 　　1.3 增殖培养 　　培养40 d左右，待小段茎杆腋芽处发出丛生芽后，将丛生芽截下转入增殖培养基中培养。待丛芽基部长出愈伤组织之后，再分株培养，以此方式进行增殖。增殖培养基（LM+1.0 mg/L KT +1.0 mg/L BA +0.02 mg/L TDZ +0.05 mg/L NAA）是在诱导培养基的基础上进行的进一步调整。 　　1.4 壮苗的生根培养与炼苗 　　在壮苗生根培养基LM+0.1 mg/L NAA、LM+0.2 mg/L NAA中培养40 d左右，待根长长后，即可将苗从培养瓶中移至培养钵中炼苗。 　　2 结果与分析 　　2.1 采样气候对染菌率的影响 　　在材料采集方面，通过对比不同天气下和同一天的不同时段采集的材料的接种成活率和染菌率发现，在晴天12：00～14：00时采集的枝条其成活率较高，染菌率最低，而阴雨天气采集的枝