绣球与圆锥绣球品种遗传多样性ISSR研究.docVIP

绣球与圆锥绣球品种遗传多样性ISSR研究 　　摘要：以绣球、圆锥绣球2个种38个品种为材料，利用ISSR分子标记技术及PopGen32软件对其遗传多样性进行分析，结果表明，100条引物中筛选出10条引物用于PCR扩增，共扩增出条带132个，其中多态性条带122个，占 92.42%，绣球、圆锥绣球2个种的多态条带比例分别为79.55%、67.42%；38个绣球花品种观测等位基因数为 1.924 2，有效等位基因数为1.676 8，Neis基因多样性指数为0.378 2，Shannons信息指?滴?0.549 7，具有较高的遗传多样性和较强的环境适应能力；绣球、圆锥绣球2个种的基因多样性为0.375 8，种内基因多样性为0.282 6，种内遗传变异占75.20%；38个绣球花品种间的遗传一致度变化范围为0.454 5～0.977 3，存在很大差异，绣球、圆锥绣球的遗传一致度为0.749 1，遗传距离为0.288 9，两者之间亲缘关系较近；UPGMA聚类分析将38个品种分成2类4个亚类，聚类结果与叶片、花的特征基本分类结果一致，可完全区分绣球与圆锥绣球2个种。 　　关键词：绣球；圆锥绣球；ISSR；遗传多样性 　　中图分类号： S685.990.3文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2017）09-0018-04 　　绣球花别称八仙花，是绣球花科绣球属（Hydrangea）植物的总称，为常绿或落叶亚灌木、灌木或小乔木，主要分布于亚洲东部至东南部、北美洲东南部至中美洲和南美洲西部，全球有60余种，我国约有37个种、7个变种，是绣球花分布较多的国家之一。目前，市场上的绣球花品种繁多，花大艳丽，性状各异，形态优美，极具观赏价值，已成为世界上极具发展潜力的花卉品种之一，在花卉产业中具有重要意义。我国具有丰富的绣球花资源，对绣球花的研究主要集中在抗逆性、扦插繁殖、组培快繁、栽培管理、病虫害防治、次生代谢物质提取与检测等方面[1-19]，而在新品种培育方面的研究较少，屈连伟等虽有报道，也仅局限于绣球花品种的杂交方面[20-21]，有关绣球花品种遗传多样性的研究报道相对较少。 　　ISSR分子标记技术是在SSR分子标记基础上发展起来的一种新型分子标记方法，具有成本低、稳定性高、操作简单、重复性高等特点[22]，近年来在园林花卉植物遗传多样性研究、亲缘关系与子代鉴定、指纹图谱构建等应用广泛。董海燕等利用ISSR分子标记技术，将41个红花??木品种聚为5类，聚类结果与叶色分类结果[23]一致；胡仲义等对重庆南山植物园中的26株川茶花古树进行分类研究，将26个品种分为5个类群，并获得山牡丹可能是由牡丹茶芽变的结论[24]；严华利用ISSR分子标记技术建立了部分国兰的指纹图谱[25]；王湘莹等成功分析了23个金银花品种间的遗传变异[26]；杨梅等将9个武当木兰典型种群分为3大类群，聚类结果与地理分布和花部特征划分基本一致[27]。此外，利用ISSR分子标记技术对崇明水仙、金叶女贞、芍药等品种或杂交后代进行了鉴定[28-30]。中南林业科技大学生命科学与技术学院通过多年努力，从国内外共收集绣球花新优品种38个，其中21个绣球花品种属于绣球种，17个绣球花品种属于圆锥绣球种，研究收集到的38个绣球花品种的遗传多样性，有助于了解绣球花品种间或种间的亲缘关系和遗传背景，可为绣球花新品种培育亲本的选择提供依据。 　　1材料与方法 　　1.1植物材料 　　绣球花材料来源于中南林业科技大学植物园绣球花品种资源库，包含绣球、圆锥绣球2个种，共计38个品种（表1），其中25个绣球花品种引自美国，12个品种源自荷兰，1个为中国原生种。 　　1.2DNA提取与检测 　　每个绣球品种采集3～5株新鲜叶片，直接带回实验室，采用天根生物科技（北京）有限责任公司的植物基因组DNA提取试剂盒提取绣球基因组总DNA；采用浓度为1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测，溴化乙锭（EB）核酸染料浓度为 0.5 mg/mL，缓冲液为1×TAE，电泳电压为5 V/cm，电泳时间30 min；电泳成像采用凝胶成像系统，DNA纯度及浓度用核酸蛋白分析仪测定；将DNA条带明亮清晰、无拖带现象、无RNA和蛋白质污染的样品于-70 ℃冰箱保存，备用。 　　1.3ISSR-PCR扩增反应体系与程序 　　以绣球基因组总DNA样品为模板，利用引物UBC855通过单因素试验和正交试验对Mg2+，TaqDNA聚合酶、引物、dNTPs、模板DNA浓度等影响因素进行ISSR-PCR扩增体系优化[31]，确定绣球品种的ISSR-PCR扩增体系为（20 μL）：10[CM（24*2]×PCR Buffer 2.0 μL，DNA 30 ng，Mg2+ 2.0[KG*3]mmol/L，ISSR