怀牛膝性善下行对通塞脉微丸中绿原酸异甘草苷哈巴俄苷与甘草素体内药代动力学影响研究.docVIP

怀牛膝性善下行对通塞脉微丸中绿原酸异甘草苷哈巴俄苷与甘草素体内药代动力学影响研究 　　[摘要] 为了探索怀牛膝对通塞脉微丸中主要活性成分绿原酸、异甘草苷、哈巴俄苷和甘草素在大鼠体内的药动学参数的影响，该研究建立了UPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆中绿原酸、异甘草苷、哈巴俄苷和甘草素4种成分的分析方法，色谱柱为BEHC18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；流动相为乙腈-0.1%甲酸水梯度洗脱，流速为0.3 mL·min-1，采用电喷雾电离源（ESI），多反应离子监测（MRM）扫描方式。结果显示，通塞脉微丸组4种成分的Cmax和AUC0-∞均比通塞脉微丸加牛膝组高，其中绿原酸的Cmax差异显著（P0-∞差异显著（Pmax和CL均无显著性差异。该研究建立的UPLC-MS/MS方法特异、快速、准确和灵敏，可用于通塞脉微丸中4种主要活性成分在大鼠体内的药代动力学研究；同时表明怀牛膝对通塞脉微丸中4种主要活性成分在大鼠体内药代动力学行为有不同程度的影响。 　　[关键词] 怀牛膝；通塞脉微丸；绿原酸；异甘草苷；哈巴俄苷；甘草素；药代动力学 　　[收稿日期] 2013-10-29 　　[基金项目] 国家自然科学基金项目；江苏省“青蓝工程”科技创新团队支持计划项目（2008-30号）；江苏省优势学科支持计划项目（ysxk-2010） 　　[通信作者] 狄留庆，教授，博士生导师，主要研究方向为中药新剂型新技术应用与评价研究，Tel：（025E-mail：diliuqing@ 　　[作者简介] 程健，硕士研究生，E-mail：chjian66@163.com 　　通塞脉片是由黄芪、金银花、怀牛膝等8味中药组成，具有培补气血、活血化瘀等功效，临床治疗血栓闭塞性脉管炎疗效确切，被列为国家中药二类保护品种[1]。通塞脉微丸是在通塞脉片基础上，经过二次开发而成的治疗缺血性脑中风的新型中药制剂，组方优化研究结果表明，减去怀牛膝后的通塞脉微丸治疗缺血性脑中风的疗效优于含牛膝的通塞脉片[2]。本文以绿原酸、异甘草苷、哈巴俄苷和甘草素为检测指标，采用LC-MS/MS联用技术，检测4种成分在大鼠体内的血药浓度，经DAS2.0药动学软件计算药代动力学参数，并比较分析“性善下行”之怀牛膝对通塞脉微丸中4种成分在大鼠体内药代动力学过程的影响。 　　1 材料 　　超高效液相色谱-TQD质谱联用仪（ACQUITY系统，美国Waters公司），MassLynx V4.1工作站。BP211D型电子分析天平（德国Sartorius公司），MicroCL 21R微量离心机（美国赛默飞世尔科技公司），微量移液器（上海科华实验系统有限公司），Vortex-Genie 2涡旋振荡器（美国Scientific Industries公司），DCY-24G 可调式浓缩仪（青岛海科仪器有限公司），默克密理博Synergy超纯水仪（德国Merck公司）。 　　怀牛膝（购置于安徽省万生中药饮片有限公司，经鉴定为苋科植物牛膝Achyranthes bidentata Bl. 的干燥根）；绿原酸对照品（购自中国食品药品检定研究院，批号110753-200413），哈巴俄苷对照品（购自上海源叶生物科技有限公司，批，异甘草苷对照品（批号Y-120-120903）、甘草素对照品（批号G-036-120919）和橙皮苷对照品（批号C-006-121221）均购自成都瑞芬思生物科技有限公司，所有对照品纯度均大于98%，为供含量测定用。甲醇（色谱纯，德国Merck公司）、乙腈（色谱纯，德国Merck公司），其余溶剂均为分析纯，水为超纯水。 　　2 方法 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱：Waters Acquity BEH C18柱（2.1mm×100 mm，1. 7 μm）。流动相：A为乙腈，B为0.1%的甲酸水。梯度洗脱：0～1.5 min（10%A），1.5～4.0 min（10%～60%A），4.0～4.2 min（60%～90%A），4.2～4.8 min（90%A），4.8～5.0 min（90%～10%A），5.0～6.0 min（10%A）。流速0.3 mL·min-1。进样量5 μL，柱温40 ℃。 　　2.2 质谱条件 　　Waters三重四级杆串联质谱仪（TQD），离子化方式电喷雾离子化（ESI），多反应监测离子扫描模式（MRM）测定；主要质谱参数为毛细管电压4 000 V，锥孔电压60 V，脱溶剂温度450 ℃，脱溶剂气体流速8 000 L·Hr-1。4种物质及内标检测离子对的选择（m/z）：绿原酸（ES+，354.895162.907）；异甘草苷（ES+，418.847256.939）；