HPV基因分型检测试剂盒常见问题课件.ppt

临床试验操作注意事项 实验室建设方面 HPV分型检测试验操作方面 DNA提取 PCR扩增 导流杂交 (详见各项操作的SOP） 临床试验操作注意事项 ——实验室建设方面 一、实验室分独立房间操作: 样本储存区（与试剂储存分开） PCR前区域 (试剂贮存及准备区, 样本处理区) PCR后区域 (PCR扩增产物分析区) 仪器及耗材独立使用，切忌前后区域交叉！试验工作服及手套独立 二、单一工作流程: PCR前区域 PCR后区域 三、实验室环境 （防止污染、保持清洁整齐、严格制定及执行各项规章） 四、试剂管理及标本管理 试剂按要求温度贮存、注意有效期，使用过的试剂拧紧归类放好； 样本清楚标记好样本号、与试剂分开贮存，使用过的样本归类放好 五、以谨慎的态度对待，并清楚记录实验結果及一些突发性问題； 临床试验操作注意事项 ——DNA提取 使用移液器吸取临床样本时，避免移液枪头碰到样本管壁。所用移液枪头均为一次性用品，切忌重复使用； 防止造成样本交叉污染 防止造成试剂被污染 正确使用移液器 临床试验操作注意事项 ——DNA提取 尽可能使用带有滤心的移液器枪头 防止形成气溶胶污染实 验室环境 防止样本DNA污染 移液器枪管 临床试验操作注意事项 ——DNA提取 DNA提取操作步骤注意事项： 加入溶液Ⅰ之前, 应确保溶液中没有沉淀出现! 以免影响提取效率. 加入临床样本时,最好在超净工作台前操作,且将用过的枪头打入到盛有10％次氯酸钠的废液瓶中, 以免样品交叉污染,影响以后的PCR检测. 在煮沸样品时,切记不要让沸水溅入到样品管中!建议水沸腾后调低火力. 每次去上清时,尽量去干净,特别是第3步骤, 以免影响提取效果. 在做PCR之前,最好将提取的样品离心5分钟, 取样时尽量不要将枪尖碰到管底的沉淀。 临床试验操作注意事项 ——PCR扩增 正确使用移液枪 防止造成样本交叉污染 防止造成试剂被污染 临床试验操作注意事项 ——PCR扩增 尽可能使用带有滤心的长头移液器枪头 防止形成气溶胶 防止样本DNA交叉污染 防止样本污染试剂 临床试验操作注意事项 ——PCR扩增 防止造成试剂被污染 移液枪头均为一次性用品,切忌重复使用 移液枪头尽可能为带有滤芯 每个区域必须用专用仪器、耗材。 进入不同房间必须穿专用工作服及带手套，离开时必须先脱去工作服及手套。 PCR后操作区域房间内的所有耗材及仪器均不能与PCR前区域混合使用。 使用前后均以次氯酸消毒液清理。 临床试验操作注意事项 ——PCR扩增 HPV 58 HPV 18 HPV 16 PCR操作不当造成污染： 临床试验操作注意事项 ——导流杂交 杂交及杂交后清洗溫度（45?C ）。 每次清洗膜后，抽液干净。 确保PCR产物变性成功。 遵守封阻反应温度及时间、酶标反应时间及显色反应时间，确保杂交结果背景正常。 正确使用移液器，移液枪及枪头专用。 HPV基因分型检测试验项目 ——临床试验结果分析及常见问题 HPV基因分型检测项目临床试验实际问题 目 录 试验开展实验室要求 HPV临床样本的采集方法及注意事项 临床试验操作注意事项 临床试验结果分析及常见问题 HPV基因分型检测试验项目 ——试验开展实验室要求 临床基因扩增实验室设置的一般原则 各区独立 注意风向 因地制宜 方便工作 “十六字方针” 基因扩增检验实验室工作流程 进入各个工作区必须遵循严格的单一方向顺序! 最佳的HPV基因分型实验室布局 每间房间必须有其专用的工作服及一次性手套； 每个工作区都应有独立的一套仪器设备及耗材； 不同区域的仪器设备及耗材不能混用; 临床样本 (原始容器中) 样本制备区 试剂准备区 超净工作台 DNA 提取 PCR 扩增区 导流 杂交区 结果通知患者 基础HPV基因分型实验室布局（1） 临床样本 (原始容器中) 样本制备区 超净工作台 DNA 提取 导流 杂交区 结果通知患者 PCR区域 基础HPV基因分型实验室