HPLC测定水中苯酚类化合物课件.ppt

* * 高效液相色谱法 测定水中苯酚类化合物 指导教师：赵建军 一、实验目的 1、初步掌握高效液相色谱仪的基本原理和使用方法。 2、了解反相液相色谱法分离非极性与弱极性化合物的基本原理。 3、掌握反相液相色谱法分离苯酚类化合物的试验条件。 4、对水中苯酚类化合物进行定性和定量分析。 二、实验原理 1、反相液相色谱法 是指流动相极性大于固定相极性的分离体系。 分离机理：基于被分离组分与固定相疏水作用力的差别。 2、定性分析： 在相同色谱条件下，任何物质都有一确定的保留值（保留时间或保留体积）。在了解样品来源、性质的情况下，在相同的色谱条件下，待测组分与标样的保留值相一致，就可以初步认定为待测组分与标样是同一物质。 3、定量分析：(外标法) 标准品： 测得保留时间或积分面积。 待测样品：测得保留时间或积分面积。 通过计算得到待测样品的浓度。 三、实验仪器与试剂 高效液相色谱仪 试 剂： 邻苯二酚、对苯二酚、间苯二酚，甲醇（色谱纯） 定性标准溶液： 邻苯二酚，对苯二酚，间苯二酚，含量均为100μgml-1单标水溶液 定量标准溶液： 含邻苯二酚，对苯二酚，间苯二酚各适量，置于50ml容量瓶中，用二次蒸馏水定容，得到质量浓度分别为100μgml-1和200μgml-1的混合标准溶液。 2、具体步骤 1)用20%甲醇清洗进样针 2)进样针吸取对本二酚标准溶液，测得保留时间吸光度（t1，A1） 3)进样针吸取邻本二酚标准溶液，测得保留时间吸光度（t2，A2） 4)进样针吸取样品溶液，测得3个峰值的保留时间，吸光度（t1’、t2’tx’ A1 ’ Ax’ A2 ’ ） 5)计算邻本二酚、对苯二酚的浓度 1．工作准备 实验室级别：温度： 相对湿度： 流动相的确认：是否过滤和脱气？ 样品确认 2．高效液相色谱柱的确认 色谱柱型号： 。色谱柱连接是否完好 ；有无漏液现象。 3、实验条件： 检测器： 检测波长 nm 流速： ml/min、 柱压力 Mpa 柱温： 0C 附Ⅱ：（预习）实 验 报 告 格 式 *