第3章：蛋白质-2013课件.ppt

2、蛋白质等电点 定义：蛋白质颗粒所带净电荷为零时所处溶液的pH 等电点不是蛋白质的特征常数， P59 影响因素： 所含氨基酸的种类和数量（有关） pI受介质中离子组成的影响 特征：pI时，蛋白质的溶解度、渗透压、导电能力及膨胀性最小。 蛋白质的等离子点：在不含盐的纯水中测定的蛋白质的等电点。 等离子点才是蛋白质的特征常数 59 应用： ①等电点沉淀（分离提纯蛋白质）—— 溶解度最小 ②电泳（分离鉴定蛋白质）——带电性质的应用 提问：如何根据等电点来分离混合液中的不同蛋白质？ P58 调整溶液pH，使不同等电点的蛋白质在各自等电点 pI处依次沉淀下来。 带电的颗粒或大分子如蛋白质在外加电场中，向带相反电荷的电极作定向移动的现象称为电泳 P59 1、透析： 提取蛋白质和酶时广泛采用 2、亲水胶体： 大多数球状蛋白溶于水，能形成稳定的胶体溶液。 蛋白质胶体溶液稳定的原因？ 蛋白质颗粒在非等电点时带有同种电荷，相斥 蛋白质颗粒表面带有很多极性基团，形成水膜。 P59-60 二.蛋白质的胶体性质 分子量大，可形成胶体溶液:布朗运动,丁达尔现象,电泳,不能透过半透膜等。 三、 蛋白质的分子量 （1道尔顿≈1.66×10-27千克） 常用的测定方法有： 沉降速度法 凝胶过滤法（分子筛层析法） SDS－聚丙稀酰胺凝胶电泳法。 P60-62 沉降系数:单位离心场沉降分子下沉的速度. 1S=1×10-13秒。 血红蛋白沉降系数4.46×10-13秒→4.46S 1.沉降速度法(超速离心法） 注意： S越大的分子其分子量就越大： 40S 20S 沉降系数S与分子量没有正比关系。 沉降系数相加没有意义： 两个亚基单独测定分别为20S、60S，但聚合体测定并不等于80S， 20S+60S≠80S 2.凝胶过滤法（Gel Filtration） 凝胶法过滤只适于球状蛋白分子测量 LogM=k1-k2Ve 蛋白质的洗脱体积与其分子量有关： （Ve为洗脱体积） 测得几种标准蛋白质的Ve； 以分子量对数对Ve作标准曲线； 测出待测样品的Ve； 查标准曲线确定其分子量。 LogM A B C LogM测 V测 3.SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS Polyacryamide Gel Electrophoresis，PAGE） 常规PAGE——净电荷，分子量，形状。 SDS－PAGE:迁移率主要取决于分子量，而电荷和分子形状无关。 可以估算出不同蛋白质的分子量。 2、β－折叠(β－pleated sheet) 平行或反平行，反平行更稳定 肽链按层排列，主链呈锯齿状； 相邻肽链主链上的N-H和C=O之间形成氢键； R侧链交替地分布在片层的上下方。 　肽链间（1条肽链的若干肽段）侧向聚集，通过相邻肽链主链上的N-H与C=O之间形成的氢键交联而成的扇面状片层结构。 P46-47 平行式 反平行式 β-折叠包括平行式和反平行式两种类型 3、β－转角（β－turn） 作用力——氢键 由四个连续的Aa残基组; n的－CO键与残基n＋3的－NH基间形成氢键 β—转角中只有1个氢键 O ……… ( 氢 键 ) ………H —C—（NH—CH—CO）2—N— R P48 4、无规卷曲（nonregular coil）  或自由回转（random coil) 没有确定规律的松散的肽链结构。有利于多肽链形成灵活的、具有特异生物活性的球状构象。 通常酶的活性中心常处在无规卷曲构象区域里。 作用力弱 P49 β－转角 β－折叠 ?－螺旋 无规卷曲 维持蛋白质二级结构的作用力是？ 答： 氢键 三、三级结构（Tertiary Structure） 维系三级结构的作用力主要有氢键、疏水作用、离子键、范德华力和二硫键等。 P49 定义：多肽链在二级结构的基础上通过侧链基团的相互作用进一步盘绕、折叠形成的借各种次级键维持的特定构象。 CH2OH CH2OH 维持三级结构的作用力 多肽链 疏水作用 氢键 二硫键 离子键 范德华力 肌红蛋白的三级结构 P50 四.蛋白质的超二级结构和结构域 超二级结构(supersecondary structure)： 超二级结构在结构的组织层次上高于二级结构，可充当 三级结构的构件，但没有形成完整的结构域。 已知的超二级结构有βαβ，αα，ββ等 。 是指多肽链上若干相邻的二级构象单元彼此作用，形成在空间上能辨认的二级结构组合体。 P51 βαβ αα β×β 结构域（structural domain） ： βαβ 由4个βαβ 组成的α/β 桶结构域 α/β桶结构域：丙酮酸激酶 单结构域蛋白质 结构域＝三级结