第三章 灭活剂 保护剂 与免疫佐剂课件.pptVIP

（二）油乳佐剂： 油乳佐剂是指一类由油类物质和乳化剂按一定的比例混合形成的佐剂，如弗氏佐剂。该类佐剂主要在抗原寻的过程中起作用，使抗原在注射部位保持稳定，为抗原在淋巴细胞中运转提供载体，增加单核细胞的形成和聚积。油水乳剂疫苗的免疫效力高低，直接与乳化作用的好坏和乳剂成分的质量有关。一种好的乳剂疫苗应是油包水或水包油型，黏度低，颗粒均匀，稳定性良好，呈乳白色。 1. 乳剂 “乳剂“是将一种溶液或干粉分散成细小的微粒，混悬于另一不相溶的液体中所成的分散体系。 被分散的物质称为分散相（内相）， 承受分散相的液体称连续相（外相）， 两相间的界面活性物质称为乳化剂。 当以水为分散相，以加有乳化剂的油为连续相时，制成的乳剂为油包水型乳剂（水／油或W／O），是生物制品采用的主要剂型。 一种好的乳剂苗，应该是W／O或O／W型，粘度较低，颗粒大小均匀，稳定性良好，呈乳白色。 水包油型乳剂（o/w）最快，油包水型（w/o）较慢，水包油包水型（w/o/w）介于其间。 2. 乳化剂 乳化剂种类： ①?天然乳化剂：多来源于动植物，如阿拉伯胶、海藻酸钠、卵黄、炼乳等。 ②?合成乳化剂：如阴离子型的碱肥皂、月桂酸钠、十二烷基磺酸钠、硬脂酸等，多用于一般药剂乳化；阳离子型的氯化苯甲烃铵、溴化十六烷三甲基铵、氯化十六烷铵代毗啶等，多用于油乳佐剂；非离子型的多元醇或聚合多元醇的脂肪酸脂类、醚类物，如月桂酸聚甘油脂、山梨醇酯、单油酸酯等，均具有一定的亲水性和亲油性基，多用于医药，化妆品乳化。 乳化剂的选择 通常可根据用途依据乳化剂的HLB值（亲水亲油平衡值）进行选择。乳化剂的HLB值与其在水中的溶解度相关，亲水性强的在水中溶解度大，HLB值高，容易形成水包油型油乳剂。 HLB值为4-6的乳化剂，适用于制造W/O型油乳剂； HLB值为8-18的乳化剂，适用于制造O/W型油乳剂。常用的司本80，HLB为4.3，在水中溶解度低，不易在水中分散，溶于多种有机溶剂，性质稳定，易形成W/O型油乳剂；而吐温80，其HLB为15.0，易形成O/W型油乳剂。 弗氏佐剂 弗氏佐剂是目前动物实验中最常用的佐剂，分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。 不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成，组分比为1～5：1，可根据需要而定，通常为2：1。 不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2～20mg/ml)或死的结核分枝杆菌，即为完全弗氏佐剂（FCA）。 一般首次注射时用1／2体积FCA加上1／2体积的抗原进行乳化，第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。如不加佐剂，则抗原量增大10-20倍。 按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。 在免疫动物前，先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，佐剂和抗原体积比一般为1：1，制备成 “油包水”乳状液。 3. 白油乳佐剂 制苗用的白油应为无多环芳烃化合物、黏度低、无色、无味和无毒性。 Drakocel-6VR，Marcol-52，Lipolul-4等是国内外常用的制苗用白油。我国目前选用杭州炼油厂的7号、10号白油和北京石油化工科学研究院的合成白油。 4. 乳化方法 研磨法：先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内，待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液，边滴边按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后，继续研磨一段时间，使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。本法适于制备大量的佐剂抗原，缺点是研钵壁上粘附大量乳剂，抗原损失较大。 * * 第三章 灭活剂、保护剂与免疫佐剂 （inactivation、 protector、 adjuvant） 第一节 灭活 一、灭活 兽医生物制品生产中的灭活，是指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力和致病性，但尽可能不影响其免疫原性，被灭活的微生物主要用于生产灭活疫苗；或指破坏诊断血清或待检血清中的补体活性，以避免补体对诊断试验的干扰作用。 微生物的灭活和致弱有本质区别 灭活的主要方法有两类：物理学方法和化学方法 物理学灭活：包括加热和射线照射等方法。前者过去使用较多，容易造成菌体蛋白变性，现基本不用；后者主要通过破坏核酸来达到灭活微生物的目的，而其它有机物一般不受影响（60Co 照射血清，照射剂量以Gy来表示）。 化学灭活：目前采用最多。用于灭活微生物的化学试剂或药物称为灭活剂。 1Gy（戈瑞）就是lkg物质吸收lJ（焦尔）的能量 50～150Gy是抑制发芽的照射剂量； 100～1500Gy是杀死害虫的照射剂量； 1～5kGy是抑制部分微生物的照射剂量； 3～7kGy是脱水蔬菜的照