谷氨酸发酵工艺课件.pptVIP

第二章 谷氨酸发酵机制 ;第一节 谷氨酸发酵机制;一、谷氨酸生物合成途径;（一）、葡萄糖的糖酵解、三羧酸循环和乙醛酸循环 ;肌肉中的葡萄糖代谢情况;（二）谷氨酸合成的理想途径;（三）由葡萄糖生物合成谷氨酸的代谢途径 ; ;5. 由葡萄糖生物合成谷氨酸的代谢途径; （1）在谷氨酸生成期，假如四碳二羧酸是100％通过C02固定反应供给，在生长期之后，理想的发酵按如下反应进行：;（2）在谷氨酸生成期，若 CO2固定反应完全不起作用，丙酮酸在丙酮酸脱氢酶的催化作用下，脱氢脱羧全部氧化成乙酰CoA，通过乙醛酸循环供给四碳二羧酸。反应如下：;3mol葡萄糖可以生成2mol的谷氨酸，谷氨酸对葡萄糖的质量理论转化率为：;7.醋酸或正石蜡原料发酵谷氨酸的推测途径;二、谷氨酸生物合成的代谢调节机制 ; 1．糖代谢(EMP途径和HMP途径)的调节 ;(1)能荷的调节;; 能荷逐渐升高时，即细胞内的能??水平逐渐升高，这一过程中AMP、ADP转变成ATP。 ATP的增加会抑制糖分解代谢，抑制如柠檬酸合成酶、异柠檬酸脱氢酶等酶的活性，并激活糖类合成的酶，加速糖原的合成。 ; 当生物体内生物合成或其它需能反应加强时，细胞内ATP分解生成ADP或AMP，ATP减少，能荷降低，就会激活某些催化糖类分解的酶(糖原磷酸化酶、磷酸果糖激酶、柠檬酸合成酶、异柠檬酸脱氢酶等)或解除ATP对这些酶的抑制，并抑制合成糖原的酶(NN合成酶、果糖-1，6～二磷酸酯酶等)，从而加速酵解、TCA循环产生能量，通过氧化磷酸化作用生成ATP。; (2)生物素对糖代谢速率的调节 ; 谷氨酸产生菌大多为生物素缺陷型。许多研究表明，生物素对从糖开始到丙酮酸为止的糖降解途径的比例并没有显著的影响，主要作用是对糖降解速率的调节。 ;2．三羧酸循环(TCA循环)的调节 ;①磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶受天冬氨酸的反馈抑制，受谷氨酸和天冬氨酸的反馈阻遏。 ②柠檬酸合成酶是三羧酸循环的关键酶，除受能荷调节外，还受谷氨酸的反馈阻遏和乌头酸的反馈抑制。;③异柠檬酸脱氢酶活力强，而异柠檬酸裂解酶活力不能太强，这就有利于谷氨酸前体物α-酮戊二酸的生成，满足合成谷氨酸的需要。 异柠檬酸脱氢酶催化的异柠檬酸脱氢脱羧生成α–酮戊二酸的反应和谷氨酸脱氢酶催化的α-酮戊二酸还原氨基化生成谷氨酸的反应是一对氧化还原共轭反应，细胞内α–酮戊二酸的量与异柠檬酸的量需维持平衡，当α–酮戊二酸过量时，对异柠檬脱氢酶发生反馈抑制作用，停止合成α–酮戊二酸。; 在谷氨酸的生物合成中，谷氨酸脱氢酶和异柠檬酸脱氢酶在铵离子存在下，两者非常密切地偶联起来，形成强固的氧化还原共轭体系，不与NADPH2的末端氧化系相连接，使α–酮戊二酸还原氨基化生成谷氨酸。; 由于谷氨酸产生菌的谷氨酸脱氢酶比其它微生物强大得多，所以由三羧酸循环所得的柠檬酸的氧化中间物就不再往下氧化，而以谷氨酸的形式积累起来。 谷氨酸对谷氨酸脱氢酶存在着反馈抑制和反馈阻遏。若铵离子进一步过剩供给时，发酵液偏酸性，pH在5.5～6.5，谷氨酸会进一步生成谷氨酰胺。;⑤在谷氨酸产生菌中，α–酮戊二酸脱氢酶先天性缺失或微弱，对导向谷氨酸形成具有重要意义，这是谷氨酸产生菌糖代谢的一个重要特征。 谷氨酸产生菌的α–酮戊二酸氧化力微弱，尤其在生物素缺乏的条件下，三羧酸循环到达α–酮戊二酸时即受到阻挡，这有利于α–酮戊二酸的积累，然后生成谷氨酸。; 3．乙醛酸循环(DCA循环)的调节 ; 在生物素亚适量条件下，琥珀酸氧化力降低，积累的琥珀酸会反馈抑制异柠檬酸裂解酶活性，并阻遏该酶的生成，DCA循环基本处于封闭状态，异柠檬酸高效率地转化为α-–酮戊二酸，再生成谷氨酸。 在生物素充足的条件下，异柠檬酸裂解酶活性增大，通过DCA循环提供能量，进行蛋白质的合成，不仅异柠檬酸转化生成谷氨酸的反应减弱使得谷氨酸减少，而且生成的谷氨酸在转氨酶的催化作用下又转成其它氨基酸，也不利于谷氨酸积累。 ;以醋酸为原料发酵谷氨酸时，醋酸浓度要低，高浓度的醋酸易被完全氧化。 当菌体内的有机酸浓度低到一定程度，DCA循环启动，此时异柠檬酸裂解酶催化生成的乙醛酸与细胞内的草酰乙酸共同抑制异柠檬酸脱氢酶，TCA循环转为DCA循环，不利于谷氨酸生成与积累； 当DCA循环运转使得TCA循环包含的某些有机酸过剩时，异柠檬酸裂解酶被抑制，乙醛酸浓度下降，解除对异柠檬酸脱氢酶的抑制，TCA循环运转。; 4．CO2固定反应的调节 ;5．NH4+的调节 ; 在谷氨酸发酵生产中，生物素缺陷型菌在NH4+存在时，葡萄糖消耗速率快而且谷氨酸收率高； NH4+不存在时，葡萄糖消耗速率很慢，生成物是α-–