梅毒血清学实验室诊断(2013年).ppt

梅毒血清学实验室诊断 四川省人民医院皮肤病性病研究所中心实验室 王有为 2013年9月 成都 “性病”概念的演化 性病：是指通过性接触而发生传播的一组传染病。 20世纪70年代以前——经典性病（venereal diseases,VD） 包括：梅毒、淋病、软下疳等 1975年，WHO——性传播疾病（sexually transmitted diseases,STD） 20世纪90年代以后——性传播感染（sexually transmitted infections,STI），包括：艾滋病、梅毒、淋病、CA、GH等。 历史的回顾 性病是一个历史悠久的疾病，多数认为梅毒是1505年由印度传入我国广东岭南。 梅毒是一个曾经广泛流行的性病，解放初期，估计的性病（主要是梅毒）患者约为1000万。 1954年之后，全国逐渐形成了一个“四级”皮肤性病防治体系。 1964年，实现了全国梅毒基本消灭的目标。 性病死灰复燃 上世纪70年代末，改革开放后， ——性观念的改变 ——性产业的出现 ——性生活方式的变化 高危人群规模在不断的增加，如：暗娼、男男性接触者、流动人口等。 ——性病在我国死灰复燃，再度流行。 现况 严重的公共卫生问题和社会问题； 临床认知水平不够，实验室诊断水平参差不齐； 实验室检测各流程存在不规范现象； 新的实验室诊断技术不断出现而又缺乏了解； 部分（如私人诊所）医疗工作存在过度诊疗或诊疗不规范，延误患者的最佳诊疗时机； 无症状感染者成为维系性病流行的重要的传染源。 如何就目前高发的性病，尤其是对梅毒进行有效监测和控制？ 如何对高危人群及潜在易感人群进行筛查，主动发现无症状的性病感染者？ 如何确定感染的病原体种类？ ——需要完善的实验室检测工作，包括检测能力建设和质量控制 性病防治工作的重点 两个系统 疫情监测系统 实验室检测系统-实验室检测能力和质量控制 一个服务 规范化医疗服务 常用梅毒实验室检测方法 病原学检测 血清学检测 梅毒血清学检测分类 （1）非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体） （2）梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体） 非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理 梅毒螺旋体一旦感染人体，在3-4周产生抗类脂质抗原的IgM和IgG的混合抗体（也叫反应素）。 未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转阴。 非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理 反应素与心磷脂形成抗原抗体反应，卵磷脂可加强心磷脂的抗原性，胆固醇可增强抗原的敏感性。 心磷脂、卵磷脂及胆固醇都是醇溶性脂类、遇水形成胶体溶液，胆固醇遇水形成结晶。 非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图 非梅毒螺旋体抗原血清学试验方法 包括： （1）快速血浆反应素环状卡片试验（RPR) （2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST) （3）性病研究实验室试验（VDRL） 所用抗原基本成分是：心磷脂、卵磷脂和胆固醇 VDRL试验——抗原组成及特点 抗原组成：0.03%心磷脂、0.21%卵磷脂、0.90%胆固醇 抗原需新鲜配制，不能保存 待检血清需灭活 需要在显微镜下观察结果 目前主要用于脑脊液检查，特异性较高 是诊断神经梅毒的重要依据，但检测阴性不能排除神经梅毒 VDRL试验—仪器材料 1、水平旋转仪、显微镜 2、试剂盒：VDRL抗原原液、VDRL缓冲液、抗原滴管及针头、带直径为14mm漆圈的玻璃反应板、VDRL试验结果判读用参照涂片 3、30ml平底玻璃小瓶、生理盐水 VDRL试验—标本采集 1、血清：新鲜血清或冻存血清； 2、脑脊液：采用腰穿术获得 一般来说，送检VDRL试验的脑脊液应采集两份，一份作脑脊液常规（白细胞≧10*106/L、蛋白含量＞500mg/L）测定，检测结果与另一份用作VDRL试验的脑脊液样本同时送性病实验室 VDRL试验—操作步骤 1、VDRL抗原配制； 2、VDRL玻片定性试验 （1）灭活：血清标本56℃灭活30分钟； （2）吸样：吸取0.05ml血清放入反应板圈中，并涂布于整个圈内； （3）加抗原：用标准针头加入1滴抗原； （4）反应：置水平旋转仪上旋转4min，180±5次/min，立即置低倍显微镜下观察。 VDRL试验—操作步骤 3、VDRL定量试验 （1）加稀释液：在圈内加入0.05ml生理盐水； （2）样本稀释：吸取0.05ml样本与第一个圈内生理盐水混合，混匀后，吸取0.05ml加至第二个圈，做系列稀释，并将稀释样本涂布于整个圈内 （3）同定性试验的（3）、（4）。 VDRL试验—结果判读 凝集反应强度分级： 3+——4+：镜下见中等大小或大的絮状物，液体清亮； 2+ ：絮状物较小，液体较清亮； 1+ ：絮