抗人PDCD10单克隆抗体的制备和鉴定-北京大学学报医学版.PDFVIP

北 京 大 学 学 报 （ 医 学 版 ） ·B)P · aVWNR89 VE !b=RC WR=cN;=MS（G89MG ;#=R#; ） c-4( *) R-( P 13( ’%%P ·论著 · 抗人!#$% 单克隆抗体的制备和鉴定 $ $ ’ $ $ $，’ $，’ ! 陈瑶瑶 ，赵云罡 ，张 婷 ，许兰俊 ，马 曦 ，赵红珊 ，陈英玉 （北京大学 $( 基础医学院免疫学系，’ ( 人类疾病基因研究中心，北京 $%%%)* ） ［摘 要］目的：制备鼠抗人程序性细胞死亡分子 $% （+,-.,/0012 3144 21/56 $% ，!#$% ）的单克隆抗体，探讨 !#$% 蛋白的结构和功能。方法：利用重组!#$% 蛋白为免疫原，免疫7897: # 小鼠，取免疫小鼠的脾细胞和同 系小鼠的骨髓瘤细胞;+’: % 进行常规融合，通过间接9=;8 的筛选和有限稀释克隆化，获得鼠抗!#$% 蛋白单 克隆抗体的杂交瘤细胞株，通过9=;8 ，1?51,@ A4-5 和免疫荧光实验等方法对其特性进行鉴定。结果：成功地建立 了* 株稳定分泌抗!#$% 蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，分别命名为BC$，DEF 和*GB 。* 株单克隆抗体的免 疫球蛋白亚类分别为=.C$（DEF 和BC$ ）和=.C’A（*GB ）。9=;8 检测的单克隆抗体腹水效价可达$H $%F 。* 株单克 隆抗体与重组!#$% 蛋白有较强的特异性反应，而与大肠杆菌细胞裂解液以及谷胱苷肽I; 转移酶（.4J5/56K-@1 ;I5,/@?L1,/?1 ，C;M ）没有交叉反应。同时，BC$ 单克隆抗体也能特异性地结合真核细胞内源性和超表达的!#$% 蛋白，免疫荧光竞争结合实验以及1?51,@ A4-5 的结果证明* 株!#$% 的单克隆抗体能够识别不同的抗原表位， 内源性以及超表达的!#$% 蛋白主要定位在细胞核。结论：获得了效价高、特异性好的!#$% 蛋白的单克隆抗 体，为!#$% 的生物学功能研究奠定了基础。 ［关键词］蛋白质类；抗体，单克隆；细胞凋亡；杂交瘤 ［中图分类号］ N*O’ ( ** ［文献标识码］8 ［文章编号］$PF $I$PFQ（’%%P ）%PI%B)PI%P !#$%%’() %)* ’*#)’+’,%’() (+ -()(,.()%. %)’/(*’#0 %1%’)0 23-%) $(1%--#* ,#.. *#%2 45 （!67645 ） $ $ ’ $ $ $，’ $，’ ! #GR S/-IT/- ，UG8V SJ@I./@. ，UG8RC MK@. ，QW 9/@IXJ@ ，Y8 QK ，UG8V G-@.I?6/@ ，#GR SK@.ITJ （$( 1+/,501@5 -L =00J@-4-.T ，!1ZK@. W@K[1,?K5T ;36--4 -L 7/?K3 Y12K3/4 ;3K1@31? ，’ ( !1ZK@. W@K[1,?K5T #1@51, L-, GJI 0/@ K?1/?1 C1@-0K3? ，71KXK@. $%%%)* ，#6K@/ ） 89:;87; =/#,’?# ：M- -A5/K@ 0-@-34-@/4 /@5KA-2K1? /./K@?5 +,-.,/0012 3144 21/56 $% （!#$% ） L-, LJ,561, ?5J2T -L 561 ?5,J35J,1 /@2 LJ@35K-@ -L !#$% +,-51K@( @#2(*0 ：7/4A: 3 0K31 \1,1 K00JI @K]12 \K56 ,13-0AK@/@5 !#$% ，6TA,K2-0/ 3144 4K@