水稻早衰突变体es5的鉴定及其突变基因的精细定位-中国农业科学.PDFVIP

中国农业科学 2018,51(4):613-625 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2018.04.002 水稻早衰突变体 es5 的鉴定及其突变基因的精细定位 1 1 1 1 1 1 1,2 1 1 王备芳 ，陈玉宇 ，张迎信 ，刘群恩 ，孙滨 ，向小娇 ，曹永润 ，程式华 ，曹立勇 1 2 （中国水稻研究所/水稻生物学国家重点实验室/浙江省超级稻研究重点实验室，浙江富阳311401 ； 河南农业大学农学院，郑州 450002 ） 摘要：【目的】对水稻叶片早衰突变体es5 进行遗传分析及精细定位，探索水稻叶片衰老的分子机制。 【方法】 es5 是嘉禾 212 经 EMS 诱变获得的一个叶片早衰突变体。利用 es5 与籼稻中恢 8015 杂交获得 F ， 1 F 自交获得分离群体 F 。在杭州和海南观察 F 和 F 的表型，并分析该突变表型的遗传行为。取 F 中隐性单 1 2 1 2 2 株，利用图位克隆方法精细定位该基因。抽穗期时对突变体和野生型叶片进行 SOD 活性、MDA 含量、可溶 性蛋白含量、叶绿素含量、净光合速率测定、组织化学分析、透射电镜观察以及衰老相关基因的表达量分 析。成熟后调查 es5 和嘉禾 212 的几个重要农艺性状。【结果】四叶期前es5 表型与嘉禾 212 相比无明显差 异，四叶期时下部叶片叶尖开始黄化衰老，随着植株的生长发育，叶片的衰老面积逐渐变大，至拔节期， 中下部叶片黄化衰老严重。与野生型相比，es5 的叶绿素 a、叶绿素 b、类胡萝卜素含量和净光合速率均显 著下降，es5 的株高、有效穗数、每穗总粒数、千粒重、结实率等农艺性状都极显著下降。伊文思蓝染色 和二氨基联苯胺染色分析结果表明，es5 叶片中含有更多的死亡细胞和过氧化氢积累。酶活性和衰老相关 参数的测量结果显示抽穗 7 d 和抽穗 21d，es5 叶片中的 SOD 活性均显著高于嘉禾 212 中 SOD 活性；抽穗 21 d 时，es5 中 MDA 含量显著高于嘉禾 212 中 MDA 含量；抽穗 7 d 和抽穗 21des5 叶片中可溶性蛋白含量均 极显著低于嘉禾 212 中可溶性蛋白含量。透射电镜观察结果表明 es5 衰老部位细胞质溶解，叶绿体结构异 常，叶绿体膜溶解，基粒模糊，基质片层疏松，类囊体发育异常，淀粉体和嗜饿颗粒增多。qRT-PCR 结果 显示 es5 中促进衰老的基因 Osh36、Osh69、OsI85、RCCR1 表达量极显著上调。2 个衰老的标志基因 Osh69 和 OsI85 表达量分别上调 12.7 和 36.6 倍。同时叶绿素降解相关基因 SGR 也显著上调。遗传分析结果表明 该性状是由单隐性核基因控制。采用图位克隆的方法将该基因精细定位在第 5 染色体上的 4BF-10 和 RM3664 两标记之间，物理距离约 52.7 kb，该区间包含 8 个开放阅读框。【结论】 es5 由于叶片的过早衰老造成与 产量相关的几个重要农艺性状显著下降。将该基因定位在第 5 染色体介于标记 4BF-10 和 RM3664 之间