蛋白质组学分析揭示玉米籽粒发育过程中胁迫相关蛋白的-兽类学报.PDFVIP

中国农业科学 2017,50(11):2114-2128 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2017.11.017 蛋白质组学分析揭示玉米籽粒发育过程中 胁迫相关蛋白的表达特性 于涛，李耕，刘鹏，董树亭，张吉旺，赵斌 （山东农业大学农学院/作物生物学国家重点实验室，山东泰安 271018 ） 摘要：【目的】从蛋白质组学的层面探讨玉米籽粒发育过程中胁迫相关蛋白的表达特性，分析其功能，揭 示籽粒自身防御系统的分子调控机理。【方法】大田条件下，以玉米品种登海 661（DH661）为供试材料，67 500 株/hm2 密度下种植，开花期人工饱和授粉后第 3、5、10、15、20、30、40 和 50 天（DAP）取果穗中部籽粒。 TCA-丙酮沉淀法提取籽粒总蛋白，用同位素标记相对定量（iTRAQ）技术进行蛋白质组学分析。通过匹配 Uniprot 玉米蛋白数据库鉴定籽粒总蛋白，并且用基因本论（GO）注释按照生物过程、分子功能及细胞组件 进行功能分类。分析鉴定籽粒发育过程中显著差异表达的胁迫相关蛋白，并且将其分层聚类以展示其在籽粒 发育过程中的表达模式。【结果】通过匹配玉米蛋白数据库，籽粒中总计鉴定到 4 751 个蛋白，这些蛋白涉及 多种生物过程与分子功能，其中代谢过程与分子过程是最主要的两个生物过程，而催化活性与绑定功能是最 主要的两个分子功能类别，表明这些生物过程与分子功能对籽粒发育具有重要作用。定量分析检测到 123 个 胁迫相关蛋白在玉米籽粒发育过程中显著差异表达，主要参与籽粒蛋白修饰（33 个）、活性氧（ROS）体内平 衡（31 个）、贮藏物质保护（17 个）、病虫害响应（8 个）及其他胁迫响应过程（34 个）。蛋白修饰相关蛋白 主要包含一系列的热激蛋白、肽基脯氨酰顺反异构酶及蛋白二硫键异构酶，并且这些蛋白在籽粒不同发育阶 段均显著积累，这对稳定籽粒中的蛋白结构具有重要作用。ROS 相关蛋白包含不同的抗氧化酶系，并且主要 在籽粒发育前、后期显著积累，维护了 ROS 的体内平衡。贮藏物质保护相关蛋白主要包含多种蛋白酶抑制剂、 油脂体蛋白及油脂体固醇蛋白，并且这些蛋白随着籽粒发育不断上调表达，保护了贮藏物质的合成与积累。 病虫害响应相关蛋白同样在籽粒发育后期显著积累，增强了籽粒对生物胁迫的抗性。其他胁迫响应相关蛋白 主要包括一系列的晚期胚胎丰富蛋白（LEA）、膜联蛋白、脂质转移蛋白、非特异性脂质转移蛋白及脂氧合酶， 其中 LEA 在籽粒发育后期显著积累，膜联蛋白与脂氧合酶主要在发育前期显著表达，而脂质转移蛋白及非特 异性脂质转移蛋白在籽粒不同发育阶段均有积累，表明这些蛋白在籽粒不同发育阶段发挥重要作用。【结论】 胁迫相关蛋白在籽粒不同发育阶段显著积累，构建了一个协同、多样、稳定的防御调控机制，维护了籽粒正 常的发育过程。 关键词：玉米；籽粒发育；iTRAQ蛋白质组学；胁迫相关蛋白；蛋白功能 Proteomic Analysis of Maize Reveals Expression Characteristics of Stress-Related Proteins During Grain Development YU Tao, LI Geng, LIU Peng, DONG ShuTing, ZHANG JiWang, ZHAO Bin (College of Agronomy, Shandong Agricultural University/State Key Laboratory of Crop Biology, Taian 271018, Shandong) 收稿日期：2016-09-29 ；接受日期：2017-02-20 基金项目：国家自然科学基金）、国家重点研发计划项目（2016YFD0300106 ，2016YFD0300205 ）、国家科技支撑计划项目 （2013BAD07B06-2 ）、国家公益性行业（农业）科研专项经费项目（20120