大丽轮枝菌酵母双杂交cDNA文库的构建.PDF

华北农学报 ·２０１５，３０（２）：５１５４ 大丽轮枝菌酵母双杂交 ｃＤＮＡ文库的构建 １，２ ２ １，２ ２ ２ ２ 康静敏 ，刘　坤 ，刘　严 ，张　怡 ，李成伟 ，谭光轩 （１．郑州大学 生命科学院，河南 郑州　４５０００１；２．周口师范学院 植物遗传与分子育种重点实验室，河南 周口　４６６００１） 　　摘要：为了分离克隆与植物互作的大丽轮枝菌致病相关蛋白基因，利用 ＳＭＡＲＴ技术构建了大丽轮枝菌酵母双杂 ７ ７ 交 ｃＤＮＡ文库。结果表明，构建的文库滴度为 ５．２×１０ｃｆｕ／ｍＬ，库容为 ３．９×１０ｃｆｕ；文库 ｃＤＮＡ插入片段长度主要 分布在 ０．５～２０ｋｂ，平均为 １ｋｂ；文库重组率为 ９６％。表明文库质量较好，为筛选与植物互作的大丽轮枝菌致病蛋 白基因奠定了基础。 关键词：黄萎病；大丽轮枝菌；酵母双杂交文库；ＳＭＡＲＴ技术 中图分类号：Ｓ４３２．１；Ｑ７８　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１０００－７０９１（２０１５）０２－００５１－０４ ｄｏｉ：１０．７６６８／ｈｂｎｘｂ．２０１５．０２．０１０ ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＹｅａｓｔＴｗｏｈｙｂｒｉｄｃＤＮＡＬｉｂｒａｒｙｏｆＶｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｄａｈｌｉａｅ １，２ ２ １，２ ２ ２ ２ ＫＡＮＧＪｉｎｇｍｉｎ ，ＬＩＵＫｕｎ，ＬＩＵＹａｎ ，ＺＨＡＮＧＹｉ，ＬＩＣｈｅｎｇｗｅｉ，ＴＡＮＧｕａｎｇｘｕａｎ （１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＺｈｅｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ　４５０００１，Ｃｈｉｎａ；２．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｌａｎｔ ＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｒｅｅｄｉｎｇ，ＺｈｏｕｋｏｕＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｏｕｋｏｕ　４６６００１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｏｓｅｅｋｏｕｔｔｈｅＶ．ｄａｈｌｉａｅｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｏｆｐｌａｎｔｗｉｔｈＶ．ｄａｈｌｉａｅ，ａｙｅａｓｔｔｗｏ ｈｙｂｒｉｄｌｉｂｒａｒｙｏｆＶ．ｄａｈｌｉａｅｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｕｓｉｎｇＳＭＡＲＴｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．ＲｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｔｉｔｅｒｏｆｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙ ７ ７ ｗａｓ５．２×１０ｃｆｕ／ｍＬ，ｔｈｅｌｉｂｒａｒｙｃｏｎｔａｉｎｅｄ３．９×１０ｃｆｕｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｃｌｏｎｅｓ，ｔｈｅｓｉｚｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｉｎｓｅｒｔｆｒａｇ ｍｅｎｔｓｒａｎｇｅｄｆｒｏｍ０．５－２．０ｋｂ，ａｎｄｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅｗａｓａｂｏｕｔ９６％．Ｔｈｅｓｅｄａｔａｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｌｉ ｂｒａｒｙｃｏｕｌｄｍｅｅｔｔｈｅｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓｏｆｓｔａｎｄａｒｄｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙ，ｗｈｉｃｈｌａｉｄａｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｓｃｒｅｅｎｉｎｇｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓｆｒｏｍＶ．ｄａｈｌｉａｅ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｗｉｌｔ；ＶｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｄａｈｌｉａｅＫｌｅｂ；ＹｅａｓｔｔｗｏｈｙｂｒｉｄｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙ；ＳＭＡＲＴｔｅｃｈｎｉｑｕｅ 　　黄萎病是一种由真菌侵染引起的土传维管系统 传统上通过作物轮作、夏季高温日晒土壤和化 病害［１－２］，其致病菌在分类学上属于半知菌亚门淡 学烟熏消毒等方法防治这种病害，但是，不仅费时费 色孢科的轮枝菌属，主要包括大丽轮枝菌（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉ 力，而且可能污染环境，又难以根除病菌的危害，收 ｕｍｄａｈｌｉａｅＫｌｅｂ．）和黑 白轮枝菌 （Ｖ．ａｌｂｏａｔｒｕｍ 效甚微，所以这些防治方法的应用受到很大限