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不同区域小油桐种质差异和ISSR分子标记分析 　　摘 要 随着社会的进步和经济的不断发展，我国的技术方面发生了很大变化。因此对于小油桐的研究有了很大的进展，对于小油桐的种质差异进行了生物研究，与ISSR分子标记相结合，进而引出小油桐种质差异与地域的关系，研究小油桐种质差异是否与地域有关。就不同地域的小油桐进行了研究，观察导致小油桐发生种质差异的原因，分别从不同的地区引进小油桐，结果显示：小油桐的种质差异与地理位置没有必然的联系， 　　关键词 小油桐；区域种质差异；ISSR分子标记 　　中图分类号：S794.3 文献标志码：B 文章编号：1673-890X（2016）15--02 　　对于小油桐产生种质差异的原因有多种，其中认为地域是一方面的原因。小油桐原产地是在美洲，但在我国的云南、广西、海南等地均有大面积的种植，当然在其他地区也有少数的种植[1，2]。小油桐种子的含油率是非常高的，且含有丰富的蛋白质，最重要的是生长速度快，发芽率高，这使小油桐的存活率很高。此外，小油桐是一种环保的植物，目前我国的原油是非常紧缺的，因此小油桐是理想的生产生物柴油的能源植物。 　　1 不同区域小油桐种质资源的收集 　　本文通过对不同地区的小油桐进行研究，并通过进行ISSR分子标记得出小油桐产生种质差异的原因。根据种植面积的不同，收集的小油桐种子主要来自我国的台湾、云南、贵州农科院、江苏沐阳、江西九江、湖北咸丰6个地区，见表1。此外，还有来自贵州、福建、重庆以及云南的小油桐树苗，分别对这些小油桐种子和小油桐树苗进行注册，主要是用来进行ISSR分子标记，其中注册见表2。 　　对于来自不同地区的小油桐种子及小油桐树苗进行了收集，并进行了编号，其目的主要是收集小油桐基因资源，选取有代表性的地区，而且该地区种植大面积的小油桐，在收集的过程中，要减少其他方面带来的影响，这样才会使结果更加准确，减少误差。要研究影响小油桐种质差异是否与地域有关，需要做到的是保证其他条件相同，只考虑不同地域的小油桐，通过比较小油桐的种子形态特征、颗粒质量以及含油率的测试，对小油桐种质资源进行ISSR分子标记等，从而更好地得出小油桐与地域的关系。通过研究得出适合小油桐生长的环境，为以后小油桐的开发利用奠下基础，这样既能培育出高品质的小油桐，又能为国家带来能源物质，还对我们国家的环保有着重要贡献。 　　2 小油桐种质资源的ISSR分子标记 　　2.1 小油桐种质的检查与观测 　　需要对于收集的小油桐种子进行一定的处理，看看种子是否出现发霉或发芽等情况，对于出现上述情况的种子将不能使用，应及时摒弃，否则会给实验结果带来影响，影响小油桐的最后测量结果，对于油桐的处理首先做的是利用天平进行各取小油桐百粒质量[3]，然后对小油桐进行去皮，根据种子的质量以及种仁的质量得出小油桐种子的出仁率，对于小油桐种子的含油率可以使用粗脂肪测定方法进行测定，最后得出小油桐种子的出油率，在对小油桐种子进行观测时，要全面考虑各方面的原因，要及时处理可能会影响结果的问题。小油桐对于我国的发展有着非常重要的作用，利用它可以生产生物柴油，也可用来进行生物防治，当然还可以进行环保，可以使我国的资源产生非常大的效益，可以预测，在未来一段时间内，它将会得到更广泛的应用，将会用在生活的方方面面，这对我们的生活是非常有利的。 　　2.2 小油桐种质资源的ISSR分子标记 　　利用ISSR分子对小油桐种质资源进行分子标记，进行标记的引物会出现不同的序列，当然扩增的条带也不相同，对小油桐种质资源进行的ISSR分子标记主要分为DNA提取和ISSR的PCR扩增。首先需要做的就是提取小油桐的基因组总DNA，对得到的多条ISSR引物进行筛选，最后得到几条带清晰，并重复性非常好的引物，对于PCR技术需要使用酶、缓冲液、引物、模板和PCR反应程序等，最后需要用到的是电泳，对于生物电泳需要严格控制温度，温度或高或低都会给结果带来很大的误差，最后在凝胶成像仪上观察照相，根据呈现出来的像进行分析，在电泳图上每一条带作为一个标记，代表一个结合反应的位点，按照同一个水平位置扩增条带的出现与否进行统计，然后分别进行标记，在进行标记的过程中，会出现各种各样的问题，因此需要及时处理在进行标记的过程中出现的各种问题，并减少误差。但是在实验的过程中会出现各种各样的误差，有些误差是不可避免的，但是有些误差是可以避免的，我们要尽量避免那些不必要的误差，这样才能保证结果的准确性，才能得到准确的结果。 　　3 对小油桐进行ISSR分子标记的结果与分析 　　3.1 小油桐种子形态以及百粒质量和出仁率分析 　　从不同的地区收集的小油桐种子在形态上差别不大，但是种子在大小上存在一定的差异。从外形上看，云南引进的小油桐种子较大，贵州引进的小油桐种