鱼肉中孔雀石绿和结晶紫的分析方法AF10146应用及技术服务部.PDFVIP

博纳艾杰尔产品应用案例 鱼肉中孔雀石绿和结晶紫的分析方法 AF10146 应用及技术服务部 摘要：本实验重现了GB/T 19857-2005 中的前处理方法，采用Cleanert® Alumina-N 小柱结合液相色 谱串联质谱 （LC-MS/MS ）对鱼肉中孔雀石绿和结晶紫进行了测定。样品经乙腈提取，Cleanert® Alumina-N 小柱净化，LC-MS/MS 进行检测，以0.1% 甲酸水和乙腈为流动相进行梯度洗脱，内标法 定量。结果表明，当加标量为2.5 µg/kg 时，回收率在90% ~ 115%之间，能够满足检测要求。 关键词：孔雀石绿；结晶紫；Cleanert® Alumina-N ；LC-MS/MS ；鱼肉 前言 孔雀石绿是人工合成的有机化合物。其生产是由 1 摩尔分子的苯甲醛 （Benzaldehyde ）和 2 摩尔分子的二甲苯胺在浓盐酸混合下，加热缩合成隐色素碱 （Leuco base ），在酸性条件下加过氧化铅使其氧化，并在碱性液中沉淀出色素碱。它 属于三苯甲烷型的绿色染料。孔雀石绿是有毒的三苯甲烷类化学物，既是染料，也是 杀真菌、杀细菌、杀寄生虫的药物，长期超量使用可致癌，无公害水产养殖领域国家 明令禁止添加。 本文通过对国标方法的重现，建立了鱼肉中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫和 隐色结晶紫同时测定的分析方法。 实验部分 仪器、试剂与材料 主要仪器设备 + AB SCEIX API 4000 液相色谱串联质谱仪。 试剂材料 乙腈为色谱纯；实验用水为超纯水；乙酸铵为分析纯； 孔雀石绿、结晶紫混合标准工作溶液：孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色 地址：天津经济开发区西区南大街179 号 邮编：300462 电话：022传真：022 Email：service@ 网址： 客服：400-606-8099 博纳艾杰尔产品应用案例 结晶紫，乙腈溶解； 内标标准溶液：氘代孔雀石绿、氘代隐色孔雀石绿，2 ng/mL，乙腈︰5 mmol/L 乙 酸铵溶液=1 ︰1 （V/V ）溶解； Cleanert® Alumina N 固相萃取小柱：1000 mg/3 mL 。 样品制备 样品提取 称取均质好的鱼肉样品5 g 置于50 mL 离心管中，加入200 µL 2 ng/mL 的内标标 准溶液，再加入11 mL 乙腈，超声提取2 min ，8000 r/min 匀浆30 s，4000 r/min 离心5 min ，取全部上清液置于25 mL 比色管中，取另一离心管加入11 mL 乙腈洗涤匀浆刀头 10 s，合并于装有样品残渣的离心管中，残渣用玻璃棒捣碎，涡旋30 s，超声振荡5 min， 4000 r/min 离心5 min，合并两次上清液，用乙腈定容至25 mL，摇匀，待净化。 样品净化 将Cleanert® Alumina-N 小柱用5 mL 乙腈活化，从上述待净化液中取出5 mL 上样 于小柱上，收集流出液于KD 浓缩瓶中，再用4 mL 乙腈洗涤小柱，收集流出液于同一 KD 浓缩瓶中，将流出液于45 ℃旋蒸至小于1 mL，用乙腈定容至1 mL，超声振荡5 min， 加入1 mL 5 mmol/L 乙酸铵溶液，超声振荡1 min，经0.22 µm 尼龙针式过滤器过滤， 待检测。 以上操作可用卓睿全自动固相萃取仪完成。 实验条件 色谱条件 色谱柱：Venusil MP C18 ，3 µm，100 Å，3.0 × 50 mm 流动相：A相-0.1% 甲酸水溶液 （V/V ），B相- 乙腈 柱 温：30℃ 进样量：5 µL 梯度洗脱条件(见表1) 表1. 液相色谱梯度洗脱条件 时间(min) 流速(mL/min) A% B% 0.0 0.3