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中国科技论文在线 豫 护 ·9e · R7 f· … 瑚 吣第 HSV-2感染人外周血淋巴细胞后TCRV3[基因片段的选择性 扩增 差拉挂 明文玉 罗利琼 傅 强 广东药学院分子生物学研究室 广州 510224 薹 湖北中医学院附属医院 武汉 430060 摘要 T细胞受体 (TCR)vB基因1—2O亚家族在识别和杀伤病毒及肿瘤抗原方面各 自有着重要的作用。本研 究采用单纯性疱疹病毒(HSV．2)感染正常人的外周血淋巴细胞(PBLs)后发现TCRvB2，6，7．8基因在体外 选择性扩增．而用HsV·2攻击生殖器单纯疱疹性皮肤病患者不同病程时期的PBLs时发现TCRV]3基因的表 达水平随病程不同而改变。结果提示VB7，8在识别HSV：2时呈选择性扩增而限制HSV一2的增殖。 美键词 TCRv 基 因 sv．2：选择性扩增 T细胞受体 T【CR)是参与特异性免疫 病毒乙型 (HSV．2)感染探讨TCR识别抗原 的重要分子，在T淋巴胞活化过程中识别和 后VB基因重排mRNA表达水平。 结合 配体 】。T细胞在发育过程 中，种系 1 材料和方法 TCR基因片段发生重排，在转录水平发生拼 接去除内含子后，细胞开始表达完整的TCR I．1 材料 邛 异二聚体。TCR 和D链V基因编码区 1．1．1 标本来源 l2例健康成年人的全血 域包括了相当于Ig的CDR1和CDR2，主要 购 自市中心血蚺，6例患有生殖器疱疹性皮 是识别MHC分子和抗原复合物。CDR3主 肤病患者及经治疗痊愈的病人来源于市皮 要是 由于V．D’J或V．D．D．J连接的多样性 防所 门诊病人。 和广泛分布的N核苷酸插入所造成，具有高 1．1．2 单纯疱疹病毒2型(HSv．2 HSv．2 度的多样性，可识别众多种类的抗原 [11。人 G株 由中国医学科学院肿瘤研究所商铭教 体TCRD链V区种系基因共有25个片段供 授赠。 挑选组成完整TCR的基因和结构受体库。 1．1．3 试 剂及 仪 器 TaqDNA 聚合酶， 现 已可能采用多种方法逐一确定每一成熟 AMV逆转录酶，RNAsindNTPs，DTT购 自 的T细胞克隆的trCR基因取用哪一VB片 Promaga公 司，DEPC，RPMI1640(Sigma 段。研究发现正常个体在没有抗原刺激下， 产品)，其他试剂为国产AR试剂。基 因扩增 外周血T细胞 中各片段的分布和表达是随 仪GeneE(英 国)，CO2培养箱 BNA．311(日 机 的。1L．2存在 条件 下外周血 淋 巴细 胞 本)，凝胶成像扫描仪 GelDoc．1000(Bio． (PBLs)的TCRVp基因随抗原类型不同或 Rad)。 疾病的不同临床阶段呈选择性扩增 [21。本研 1．2 方法 究取不同病程时期病人的PBLs用单纯疱疹 1,2．1 细胞分离培养 50ml血用Ficoll密 ·1995年国家 自然科学基金助 度梯度 离心分 离单个核细胞 [31，用RPMZ 1640 培养，每管2--2．5ml，分别加入维持量