紫菜活性肽复合酶法制备与清除羟自由基作用-水产科学.PDF

第31卷第8期 水产 科 学 V01．31No．8 2012年8月 FISHERIESSCIENCE Aug．2012 紫菜活性肽复合酶法制备与清除羟自由基作用 姚兴存，张 燕，盘赛昆，舒留泉 (淮海工学院江苏省海洋生物技术重点实验室，江苏 连云港 222005) 摘要：以条斑紫菜为原料，利用胰蛋白酶和木瓜蛋白酶组成的复合酶水解紫菜蛋白制备生物活性肽 并研究清除羟自由基作用。采用单因素试验考察胰蛋白酶与木瓜蛋白酶的比例、底物质量浓度、酶用 量、水饵温度、水解时间、pH对羟自由基清除率及水解度的影响，响应面法优化酶解条件，SephadexG- 15凝胶层析法测定活性肽的分子质量分布。试验结果表明，复合酶最佳酶解工艺条件为胰蛋白酶与 7．0，温度55℃，酶解4h， 木瓜蛋白酶复合酶比例1．67，底物质量浓度20mg／mL，酶用量1．67％，pH mg／mL，分子质量大 紫菜活性肽对羟自由基的清除率为80．6％，清除率为50％时的质量浓度为0．744 ku。 多分布于500～1500 关键词：条斑紫菜；复合酶；清除率 中图分类号：TS254 文献标识码：A 文章编号：1003—1111(2012)08-0490—05 yezoensis)为东亚地区国胰蛋白酶(酶活力2．5×105U／g)、木瓜蛋白酶 条斑紫菜(Porphyra (酶活力3．5×106 家人工养殖的大型食用海藻，我国是紫菜生产的重 U／g)(美国BBI试剂公司)；辅酶 要国家，主要养殖海区在长江以北的江苏沿海。目 前，紫菜的主要利用途径是作为淡干品或者调味紫 胁脱氧核糖、硫酸亚铁、铁氰化钾、硫代巴比妥酸 菜而直接食用，已经上市的深加工产品较少。 (TBA)、抗坏血酸(国药集团化学试剂有限公司)； 近年来，有学者对紫菜中的活性成分特别是紫 其他试剂皆为国产分析纯。 菜蛋白进行了较深入研究，开展了紫菜蛋白提取技 1．2主要仪器 术睁2|、酶法制备降血压肽和抗氧化肽‘3’53等工作， T6新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通 取得了一定进展。但是，这些研究制备活性肽使用 用仪器有限责任公司)、PrimoR多用途台式高速 的蛋白酶大都为单酶，由于单酶对肽键作用的专一 性，水解程度受到一定限制且酶解产物生物活性较 弱。复合酶水解的2种酶由于作用位点不同，增大 了底物水解程度，暴露出更多的活性氨基酸残基， (宁波科生仪器厂)、FW一100高速万能粉碎机(天津 提高了酶解产物活性。本试验以作用最适pH接 市泰斯特仪器有限公司)、RE-501旋转蒸发仪(南 近的胰蛋白酶和木瓜蛋白酶组成复合酶，通过单因 京金正科教仪器有限公司)。 素试验和响应面法优化酶解工艺，研究紫菜活性肽 1．3试验方法 的清除羟自由基作用，对开发紫菜功能食品具有一 1．3．1紫菜蛋白提取 定意义。 紫菜蛋白采用水提酸沉法提取[61]：称取1g紫 菜干粉，加入100mL水混匀，保持50℃超声辅助 1材料与方法 min，4000 min，加少量水，重