细胞生物学B-吉林大学国家级生物教学示范.DOC

细胞生物学实验B（343022）实验教学大纲 01．教学单位名称：生命科学学院 02．实验中心名称：吉林大学国家级生物实验教学示范中心 03．课程名称：细胞生物学实验B 04．课程代码：343022 05．课程类别：学科基础课程 06．课程性质：必修 07．课程学时：48 08．课程学分：1.5 09．面向专业：制药工程、药物制剂 10．实验课程的教学任务、要求和教学目的 10.1 教学任务： 细胞生物学是生命科学的一个重要分支，是生物科学、生物技术、制药工程专业的一个重要的学科基础必修课，主干课。细胞生物学实验使学生掌握和了解本学科的主要研究方法与技术，巩固和加深基础理论知识，提高分析、解决问题的能力和开拓创新能力，培养学生的科学思维、动手能力、探索精神，从而使学生的细胞生物学实验技能全面提高。 10.2 教学要求： 要求学生掌握细胞生物学的基本操作和基本技能，特别是细胞生物学实验石蜡切片的制作及染色技术；动物细胞培养及细胞融合；植物组织培养等基本实验操作技术。 10.3 教学目的： 培养学生实际动手能力及观察问题和解决问题的能力，同时掌握和初步了解细胞生物学实验的基本技术和方法，如涂片、铺片、徒手切片、细胞传代等，并且进行创新实验的设计。 11．学生应掌握的实验技术及实验能力 通过本实验课程，学生应熟练掌握血涂片的制备法，小鼠肠系膜铺片法；徒手切片法；细胞活体染色技术；石蜡切片的制作技术及特征性染色方法等基本原理及操作技术；掌握荧光显微镜的使用；掌握动物细胞培养及细胞融合、细胞凋亡、细胞生理性实验；植物组织培养及植物原生质体的分离、融合、体细胞杂交、细胞器的分级分离等基本原理及操作技术。 12．开设实验项目 徒手切片、石蜡切片、冷冻切片的制作技术实验项目，包括徒手切片操作技巧，制作出易于观察细胞形态及细胞组成成分的切片；包括切片机的操作要领，切片的制作技巧，制作出符合HE染色、PAS染色、Feulgen染色的石蜡切片、冷冻切片。 细胞培养无菌操作技术实验项目，包括无菌操作台、臭氧发生器、二氧化碳培养箱的使用及维护保养技术；包括培养基的配制及灭菌的方法；包括细胞室处理及检测技术。 细胞的冻存及复苏技术实验项目，包括程序降温仪、细胞冻存盒、液氮罐的使用，包括细胞冻存、细胞复苏的注意事项，包括细胞冻存及复苏技术。 植物组织培养无菌操作及观察技术实验项目，包括植物组织培养所需培养基的配制，包括培养时无菌操作，培养过程中及培养结果的观察，包括植物组织培养无菌操作及观察技术。 徒手切片、装片、涂片的制作及细胞结构的观察实验项目，主要实验内容包括血涂片的制备；红细胞及各种白细胞的形态观察；显微镜测微尺的使用；植物细胞的基本结构观察；细胞后含体的观察和鉴别；小鼠肠系膜铺片；花生、向日葵徒手切片及细胞中脂类的染色，脂肪显示技术；中性红染液染小麦或黄豆幼根根尖液泡系；詹纳绿B溶液染人口腔粘膜上皮细胞线粒体；线粒体、液泡系的活细胞术。 石蜡切片的制备及细胞的染色观察实验项目，主要实验内容包括制作石蜡切片，HE染色观察；PAS反应，观察多糖在细胞中的移动；Feulgen染色，观察DNA染色结果。 细胞器的荧光标记技术实验项目，主要实验内容包括荧光显微镜的使用；罗丹明标记的鬼笔环肽染色；超声波法制备脂质体；冻融法制备脂质体；冷冻干燥法制备脂质体；脂质体转染技术。 植物组织培养、细胞悬浮培养及原生质体的分离培养实验项目，主要实验内容包括植物组织培养；植物细胞的悬浮培养；植物原生质体分离和培养；PEG方法诱导植物原生质体融合；根据亲本原生质体的形态标志来鉴别杂种细胞。 电镜制片技术实验项目，主要实验内容包括超薄切片制作；扫描电子显微镜样品制备。 免疫胶体金技术实验项目，主要实验内容包括制备胶体金，标记山羊抗鼠Ig抗体并检测效果。 动物细胞的融合实验项目，主要实验内容包括制备细胞悬液；50％PEG溶液进行细胞融合；詹纳斯绿染色观察细胞融合的现象。 动物细胞传代与原代培养实验项目，主要实验内容包括细胞的消化分散；细胞计数；传代细胞培养；原代细胞培养；细胞冻存及复苏；小鼠解剖及所需组织分离粉碎处理。 细胞器的分离与鉴定实验项目，主要实验内容包括细胞器的分级分离；玉米线粒体的分离与观察；观察离体叶绿体对染料的还原作用；制备大鼠肝细胞匀浆；差速离心细胞器；培育玉米种子芽；分离制备收集存放线粒体；制备叶绿体并对分离物进行鉴定。 细胞生理性质实验项目，主要实验内容包括制备羊血细胞悬液及低渗溶液；研究红细胞的渗透性；进行小鼠实验前处理及小鼠腹腔注射血红细胞，于显微镜下观察小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象。 细胞凋亡过程中DNA及蛋白检测实验项目，主要实验内容包括诱导肿瘤细胞凋亡，提取凋亡细胞中