表面等离子共振法SPR测定抗体亲和力.PDF

活性蛋 白整体 方案 Active Protein Solutions 表面等离子共振法 （SPR ）测定抗体亲和力 表面等离子共振技术 （surface plamon resonace technology ，SPR ）是上个世纪 80 年代发展起来的以生物传感 芯片 （biosensorchip ）为中心的一种新技术。此后人们开始研究用各种方法改进 SPR的性能、简化仪器系统 ，并 试图用 SPR技术测量不同的生化物质 ，测试范围包括 ： DNA-DNA 间的生物特异性相互作用 蛋白质折叠机制的研究 微生物细胞的检测 抗体 －抗原分子亲和力测定 本文对于表面等离子共振技术的原理和其在测定抗体亲和力作了简要的概述。 全内反射是一种普遍存在的光学现象。考虑一束平面光波从介质 1表面进入到介质 2 中。入射光在介质 1表面上一 部分发生反射 ，另一部分则透射进介质 2。入射角和透射角之间满足关系式 ： n1sinθ1=n2sinθ2 这里 n1是介质 1的折射率 ，n2是介质 2 的折射率。当入射角增大 ，增大到临界角 θc 时 ，这时的透射角为 90° ；当入射角继续增大到大于临界角时 ，光不再透射进介 质 2 ，也就是发生了全反射。由snell定律可知 ： θ2=90° θc=arcsin(n2/n1) 由上式可知 ，当 n2<n1时 ，全反射就可能发生。从几何光学的角度来看 ，当光发生全反射时 ，光会在介质 1界面 上完全反射而不进入介质 2 中。实际上 ，由于波动效应 ，有一部分光的能量会穿过界面渗透到介质 2 中 ，平行于界 面传播。这部分光场就是所谓的消失波。一般情况下隐失波在折射率小的介质中传播一段距离 ，再回到折射率大的 介质 ，使光的全部能量都回到第一介质中。如果隐失波的频率与金属表面振荡的自由电子 （即等离子 ）频率一致 ， 则金属表面的等离子就吸收光能发生共振 （surface plasmon resonance ，SPR ），使反射光强度减弱 ，这时的入 Tel:(025) 5889-4959 www.DetaiB Sales@DetaiB 活性蛋 白整体 方案 Active Protein Solutions 射角为共振角 （SPR角 ）。SPR随金属表面的折射率变化而变化 ，而折射率的变化又和结合在金属表面的生物分子 质量成正比 ，因而可通过对生物反应过程中 SPR角的动态变化获取生物分子相互作用的特异信号。 BIACORE表面等离子共振仪的构成与工作原理 BIACORE表面等离子共振仪基于 SPR原理的新型生物传感分析技术 ，它在不需使用荧光或同位素标记甚至无须纯 化各种生物组分的天然条件下 ，通过传感器芯片实时监测各类生物分子如多肽、蛋白质、寡核苷酸、寡聚糖、类脂 甚至全病毒、细胞之间相互作用的整个过程 ，并通过分析软件获取生物分子结合、解离、亲和性、特异性、协同、 拮抗、反应速率、浓度变化等互作动力学参数。 表面等离子共振仪主要由五部分组成 ：芯片、光学系统、液体处理系统、控温系统和计算机软件。其工作原理是基 于 SPR技术来实时追踪生物分子间的相互作用。实验时先将一种生物分子固定在传感器芯片表面 ，再通过微射流 卡盘将含有相互作用的分子溶液传送至传感器芯片表面 ， SPR光学检测系统则跟踪检测溶液与芯片表面的分子结 合和解离的全过程。数据分析软件处理实验过程中获取的 各种特异性信号 ，并将其整合成最终的实验结果。由于其 高度的自动化和灵敏特异性且具常规仪器方法难以比拟 的实时 ，动态监测优点 ，所以被广泛地应用于各种生命现 象分子机理研究。 表面等离子共振仪芯片结构 在表面等离子共振仪中 ，最核心的结构是芯片。芯片的玻璃表面附有一层金膜 ，一种待检分子 （liga