小鼠非手术胚胎移植器简介-中国试验动物信息网.PDFVIP

小鼠非手术胚胎移植器简介 (Transcervical embryotransferdevice,TCET) 小鼠非手术法胚胎移植虽然早在1951 年就出现了，但由于移植成功率很低而一直没有 得到普遍应用。经过多年不懈努力，河北农大李相运博士终于建立了高效小鼠非手术胚胎移 植技术，居国际领先水平。利用该技术可以简便快捷地将囊胚或桑椹胚通过子宫颈移入子宫 角内，只需几十秒钟就可完成操作过程，节省费用、不需手术、不易感染、无痛苦、符合实 验动物福利原则，而且移植效率高于手术法胚胎移植。以CD-1 小鼠为例，如果将自然妊娠 天囊胚 （或桑椹胚）移植假孕 天 受体小鼠子宫， 以上的受体小鼠可以妊娠， 3.5 2.5 CD-1 80% 以上的移植胚胎可以出生成活胎儿。该技术可用于以下几个方面：（）通过非手术法， 70% 1 将早期囊胚或桑椹胚移入小鼠或大鼠的单侧子宫角内；（）通过非手术法，向小鼠或大鼠的 2 子宫角内注射空气、植物油、玻璃珠或其他刺激物而诱导子宫内膜蜕膜化；（）通过非手术 3 法，向小鼠或大鼠的子宫角内移植实验材料，如药物、病毒、抗体、基因等；（）通过非手 4 术法，向小鼠或大鼠的子宫角内移植精液；（）更重要的是，该技术可以作为研究人类和其 5 他大动物非手术胚胎移植技术的动物模型；（）用于开发其他小动物非手术胚胎移植技术， 6 如兔子、仓鼠、树鼩、狗、猴子等。 一、TCET 使用方法： （1）在35mm 或者60mm 的培养皿的底部做3个50 微升的液滴 （M2、KSOM、或者添加 0.2%BSA 的PBS等都可以作为移植液使用），体视显微镜调至最小倍数，将要移植的胚胎 洗剂后6-12 枚紧密聚集在一起，使胚胎在视野中所处的位置尽量靠近视野上部边沿。 （2） 左手持TCET，使之以接近垂直的方向靠近胚胎，同时，右手捏住TCET 手柄，先吸 取2mm 空气，然后再缓慢吸取胚胎，吸取胚胎的液体的长度最好控制在2mm-4mm 之间， 越少越好。吸好胚胎后，再在TCET 的顶端吸2mm 空气，然后水平放置TCET。 （3）受体小鼠保定于鼠盒盖子上面 （对于初次使用者，最好先将小鼠麻醉，熟练掌握该技 术后，可以不麻醉），将开膣管放入小鼠阴道，轻轻下压开膣管，使子宫颈口突入开膣管内， 在长臂纤维光源灯下观察子宫颈口，如果子宫颈口周围有粘液，可用棉签轻轻除去粘液，大 多数情况下，受体小鼠子宫颈口外观呈∞字型，TCET 紧靠子宫颈口腹部一侧 （即∞字型的 右侧）进入。 （4） 右手持TCET，使TCET 的弧度向外，进入子宫颈口5mm 后，右手持TCET 顺时针 旋转90 度，缓慢进入TCET，直至TCET 的黄色标记管接触到子宫颈口，如果中途遇到阻 力即可停止，停留15秒，左手固定TCET，右手按压TCET 手柄，双手松开TCET，然后缓 慢旋转退出TCET。 （5） 移植完成后，检查TCET 内是否遗留胚胎。 二、移植注意细节： （1）该技术选用8周龄、体重26 克以上的CD-1小鼠作为受体，该小鼠比较温顺，即使不 麻醉也容易保定。昆明鼠也可作为受体。在准备假孕受体时，必须挑选自然发情的小鼠与结 扎公鼠交配，受体鼠不能进行激素超排处理。 （2）对于初学者，可用成年小鼠多次练习TCET 技术，且移植前最好先将小鼠麻醉，这样 便于观察子宫颈口和插入TCET，当熟练掌握该技术后，可以不用麻醉。 （3）可将囊胚或桑椹胚移入假孕2.5 天小鼠子宫，也可将囊胚移入假孕3.5天的子宫，但出 生率会下降。 （4）避免在吸取胚胎的过程中在管壁内侧形成气泡。 （5）如果插入TCET 时遇到阻力，不要强行用力插入，这样可能导致扎穿子宫。或