叶绿体分裂蛋白PDV1胞质侧结构域可溶性表达条件的研究及纯化.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，３２（６）：３５４２ 叶绿体分裂蛋白ＰＤＶ１胞质侧结构域可溶性 表达条件的研究及纯化 韩翠晓　李　锋　严孝金　冯　舵　李倩倩　 高宏波　高　伟 （北京林业大学生物科学与技术学院理学院　北京　１０００８３） 摘要　目的：探索叶绿体分裂蛋白ＰＬＡＳＴＩＤＤＩＶＩＳＩＯＮ１（ＰＤＶ１）胞质侧结构域的高效可溶性表达 条件，并得到高纯度目的蛋白。方法：通过改变表达载体种类、基因片段大小、诱导剂浓度、诱导 温度的方法，以及运用分子伴侣的协助，实现目的蛋白高效可溶性表达。通过镍柱亲和层析和分 子筛层析纯化目的蛋白。结果：（１）带Ｈｉｓ标签的目的蛋白大部分以包涵体形式存在于沉淀中； （２）截掉疏水区域并与增溶标签 ＧＳＴ或 ＮｕｓＡ融合表达，再通过改变诱导表达条件，可以实现 ＰＤＶ１胞质侧结构域的可溶性表达；（３）比较目的蛋白可溶性表达量，选择高效可溶性表达体系， 并在该条件下纯化得到高纯度目的蛋白。结论：ＰＤＶ１胞质侧结构域的高效可溶性表达及纯化， 为进一步研究该蛋白的结构及其在叶绿体分裂过程中的作用奠定了一定基础。 关键词　叶绿体分裂　ＰＤＶ１胞质侧结构域　可溶性表达　蛋白纯化 中图分类号　Ｑ７８６ 　　叶绿体是广泛存在于植物细胞中具有双层膜的一 到内膜，再到膜间隙，再通过外膜最后到达细胞质。 种半自主性细胞器，起源于早期具有光合能力的内共 ［１０］ ＭｉｎＤ、ＭｉｎＥ和ＡＲＣ３ 定位于叶绿体基质中，通过促 生蓝细菌，以二元分裂的方式进行增殖。叶绿体分裂 进或抑制ＦｔｓＺ聚集，调节分裂位点的位置［２３，６］。研究 是一个很重要的生命过程，它维持着子代细胞与亲代 发现，ＭＣＤ１对于叶绿体分裂位点的选择也具有重要 细胞之间的连续性，并保证了细胞中叶绿体数目。 ［１１］ 作用 。ＡＲＣ６是位于叶绿体内膜上的跨膜蛋白，Ｎ端 　　参与叶绿体分裂的蛋白既有原核起源的蛋白也有 在叶绿体基质中，与 ＦｔｓＺ２１的核心结构域相互作用， 真核宿主细胞起源的蛋白，各种蛋白相互作用组成了 促进并稳定 ＦｔｓＺ环的形成［４，１２］；Ｃ端与叶绿体外膜蛋 一个复杂的叶绿体分裂复合体。最初发现的叶绿体分 白ＰＤＶ２的Ｃ端在膜间隙中相互作用，使ＰＤＶ２定位到 裂蛋白大都是原核细胞分裂蛋白的同源蛋白，如ＦｔｓＺ１ ［１３］ 叶绿体外膜分裂点处 。最近，在叶绿体内膜上还发 ［１］ ［２］ ［３］ ［４］ 和ＦｔｓＺ２ 、ＭｉｎＤ 、ＭｉｎＥ 和ＡＲＣ６ 等，而后又相继 现了ＡＲＣ６的同源蛋白ＰＡＲＣ６，其拓扑结构与ＡＲＣ６相 ［５］ 发现了真核宿主细胞起源的蛋白，如ＡＲＣ５ 、ＰＤＶ１和 似。ＰＡＲＣ６或许直接或间接与叶绿体外膜蛋白ＰＤＶ１ ［６］ ＰＤＶ２ 等。除了上述提到的直接参与叶绿体分裂过程 的Ｃ端相互作用，并协助ＰＤＶ１定位到叶绿体外膜分裂 的蛋白以外，研究者也发现了一些其它叶绿体分裂相 ［１４］ 位点处 。之后，ＰＤＶ１和ＰＤＶ２共同起作用将细胞质 ［７］ ［８］ ［９］ 关蛋白，如ＧＣ１ ，ＡｔＣＤＴ１ ，ＭＳＬ和ＭＳＬ３ 等，但是