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针灸血清和蛋白质组学研究 　　【关键词】针灸血清；蛋白质组学；血清蛋白质组学 　　【中国分类号】R245【文献标识码】A【文章编号】1044-5511（2011）11-0009-01 　　 　　针灸血清的概念来源于20世纪80年代的“血清药理学”和90年代的“中药血清”研究。针灸血清的概念于1996年公开提出。1998年杨永清研究员的针灸血清研究获得国家自然科学基金资助。目前已成为针灸研究的一个新亮点［1］。 　　1. 针灸血清 　　“针灸血清”研究，是指将针灸处理后的人或动物体中采集到的血清，作为效应物质加到另外一个反应系统中，与在体或离体器官、组织、细胞或分子等靶目标接触，通过它们的形态学或功能的改变，直接观察针灸处理后产生的效应［2］，是近年来针灸领域中提出的一种新的研究思路和方法，目前已广泛应用在哮喘、肿瘤、心肌缺血、脊髓损伤等疾病的研究中，实现了针灸离体实验方法学的改进，为针灸研究开辟了一条新的道路。 　　2.蛋白质组学 　　蛋白质组学的研究目前已经成为当今生命科学的热点之一。蛋白质作为生命活动的主要承担者，在机体生理功能中发挥着重要作用，一直以来也是研究的重点。其概念最早是由澳大利亚（1994）Wilkins和Willias提出。蛋白质组学是在特定细胞或组织水平上对蛋白质的表达进行研究，具体说它是对不同空间和时间上发挥功能性特定蛋白质群组进行研究，即在蛋白质水平上探索其作用模式、功能机理、调节调控，以及蛋白质群组内相互作用，运用这项技术可以在正常与病理情况下检测蛋白质的差异表达。运用蛋白质组学技术在临床方面可以研究特定蛋白与疾病的关系，从而找到疾病标记蛋白，为疾病诊断、病理分析、药物筛选、新药开发等，提供理论依据［3］。 　　3.血清蛋白质组学 　　 血清中含有90-91%的水，6.5-8.5%的蛋白质和2%作用的低分子量蛋白质。血清中广泛存在的蛋白质种类大约有10000种，大多数蛋白的含量非常低，即低丰度蛋白。而低丰度蛋白的识别非常重要，潜在的新的疾病生物标志分子往往呈现低丰度。并且许多低丰度蛋白常常行使着“信使”的作用。由于血清蛋白组成极为复杂，因此血清蛋白质组学的关键在于能否将所研究的血清样本进行有效地分离。血清蛋白质组学是指研究选定的目标人群血清中所表达的全部蛋白质，在建立正常蛋白质表达图谱的基础上，寻找差异蛋白质点,鉴定疾病相关蛋白质，进而研究其功能和结构，为研究重大疾病病理生理学机制、早期诊断的特异性标志物、药物作用靶点等开辟新的途径。 　　4.血清蛋白质组学技术 　　（1）双向聚丙烯酰胺凝胶电泳（two-dimensional polyacrylamide gel electro-phoresis,2D）：双向电泳是一种方便、灵敏的蛋白质分离方法。双向电泳的第一向是等电聚焦，根据蛋白质等电点不同将其分离。双向电泳的第二向是SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacry-lamide gel electrohoresis,SDS）［4］：根据蛋白质分子质量不同进一步分离等点相同的蛋白质。双向电泳技术因其分辨率高、可重复性好、结果直观、实验成本较低等特点，已成为蛋白质组研究中最常用的分离技术。另外固定化PH梯度技术可以把目的蛋白固定在极狭窄的凝胶区域加以分离，提高2D的重复性与上样量。虽然2D分辨率很高，但不能被用于分析低含量蛋白质，灵敏度低，这又与生物体内蛋白质种类数目繁多相比，远不能满足需要，因而容易阻碍早期状态疾病特异性标志物的发现。 　　（2）质谱技术(mass-spectrometry,MS) MS技术的应用是蛋白质组学研究中的重大进展，它具有高通量、准确、灵敏和操作自动化等优点，已取代传统的Edman降解测序和氨基酸组成分析，成为蛋白质鉴定的核心技术。MS技术根据电离源的不同分为2种：1种是基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization -time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS)，其原理是利用氮源脉冲激光使基质吸收激光的能量使固相的多肽样品离子化，离子化的肽段进入质量分析器，因质量/电荷比(m/z)差异发生电离，通过测量肽段离子的相关参数，可获得肽质量指纹(peptidemass finger-print PMF)、肽序列标签(peptide sequence tag, PST)或部分氨基酸序列,然后用相应的软件寻找蛋白质组数据库，实现对蛋白质的定性鉴定或定量分析。Baumann等［5］通过一系列试验试图使血清蛋白质组学MALDI-TOF-MS技术标准化，并认为单纯解冻的血清标本重复性最好,通过标准