美洲大蠊肠道内生微杆菌的分离鉴定及其抑菌活性研究-生物技术通报.PDF

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2018, 34 6 :172-177 美洲大蠊肠道内生微杆菌的分离鉴定及其抑菌活性研究 刘凌燕  陈志宇  曾还雄  林培彬  金小宝 （广东药科大学基础学院 广东省生物活性药物研究重点实验室，广州 510006） 摘 要 ： 对美洲大蠊肠道内生微杆菌进行形态学和分子生物学鉴定，对其抑菌活性进行初步研究，并从基因水平分析微杆 菌产生卤化次级代谢产物的潜力。利用平板划线法对美洲大蠊肠道内生微杆菌进行分离和纯化，革兰氏染色后进行光学显微镜观察， 并利用16S rDNA PCR、BLAST 同源性比对和构建系统发育树等方法对分离菌株进行分子生物学鉴定以及部分抗生素合成关键酶基 因的筛选。在此基础上，以8 株常见致病菌为指示菌，利用牛津杯法对分离菌株的抑菌活性进行初步研究。分离得到的8 株微杆 菌其菌落颜色呈淡黄色或白色；16S rDNA 基因测序和BLAST 比对结果表明，该8 株微杆菌与已知微杆菌同源性均达到98% 以上， 系统发育树结果表明8 株微杆菌与土壤、海洋来源的微杆菌同源性较高。部分抗生素合成关键酶基因筛选结果表明8 株微杆菌中 有6 株至少对FADH2- 依赖性卤化酶、非核糖体多肽合成酶 （NRPS）及I 型聚酮合酶 （PKSI）3种基因中的2 种呈阳性表达。抑 菌实验显示，8 株微杆菌中有6 株微杆菌对受试真菌和细菌的生长表现出了不同程度的选择性抑制作用，表明美洲大蠊肠道存在具 有抑菌活性的内生微杆菌。 关键词 ： 美洲大蠊 ；内生微杆菌；16S rDNA 系统发育树；抑菌活性 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2017-1103 Isolation and Identification of Endophytic Microbacilli in the Gut of Periplaneta americana and Their Antibacterial Activity LIU Ling-yan CHEN Zhi-yu ZENG Huan-xiong LIN Pei-bin JIN Xiao-bao （School of Basic Courses ，Guangdong Key Laboratory of Pharmaceutical Bioactive Substances ，Guangdong Pharmaceutical University ， Guangzhou 510006 ） : This work is aimed to investigate the morphology and molecular biology of the endophytic microbacilli in the intestine of Abstract Periplaneta americana ，to study its antibacterial activity，and to analyze its potential of producing halogenated secondary metabolites at the gene level. The endophytic microbacillus in the intestine of was isolated and purified by plat