酶联免疫吸附法检测乙肝表面抗原弱阳性结果分析和报告.docVIP

酶联免疫吸附法检测乙肝表面抗原弱阳性结果分析和报告 　　【摘 要】目的：对酶联免疫吸附（ELISA）法测定乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）弱阳性结果进行分析与探讨。方法：对ELISA法检测的1025例HBsAg阳性标本中出现的110例弱阳性标本分别用胶体金法与化学发光法进行鉴别与定量分析。结果：110例弱阳性标本中有50例为后带效应导致，胶体金法检测强阳性，HBsAg化学发光法定量检测均250IU/mL；15例为真弱阳性，胶体金法检测阴性，化学发光法定量检测结果在0.05-5.00IU/mL之间；45 例为假阳性，胶体金法与化学发光法均为阴性，假阳性率为4.39%。结论：加强检验前、中、后质量管理，避免假阳性结果的报告；对HBsAg弱阳性结果用胶体金法与化学发光法进行复查，并加强与临床医患的沟通。 　　【关键词】酶联免疫吸附法；乙型肝炎病毒表面抗原；弱阳性 　　【中图分类号】R 512162 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2014）04-2464-01 　　酶联免疫吸附试验（ELISA）法是临床进行乙型肝炎病毒（HBV）诊断的主要方法之一，其试验灵敏度高，特异性好，操作简便，在国内广泛应用。但在工作中常常会遇到弱阳性标本，为了防止假阳性结果的报告，本院采用胶体金法与化学发光法进行鉴别，可避免不必要的医患纠纷。同时，通过对我院1025例HBsAg阳性标本中出现的110 例弱阳性标本进行分析与探讨，查找产生假阳性结果的影响因素，找到行之有效的解决办法；对于真正处于窗口期感染的弱阳性结果及由后带现象影响的弱阳性结果，及时与临床医患沟通，便于对乙型肝炎的诊断与治疗。 　　1 材料与方法 　　1.1 标本来源 选择2013年6月至11月在白城中心医院申请检查HBsAg的住院及门诊患者，用真空负压管取被检者清晨空腹静脉血3mL，3000转/分离心10分钟，要求无脂血、溶血标本。在1025例ELISA法检测HBsAg阳性标本中选择110例弱阳性标本，同时进行胶体金法与化学发光法的检测。 　　1.2 试剂 初检用上海科华公司生产的HBsAg诊断试剂盒（ELISA法）；复检用杭州艾博公司生产的HBsAg检测试剂盒（胶体金法）；最后确诊用美国雅培公司生产的HBsAg诊断试剂盒（化学发光法）。 　　1.3 仪器 上海科华KHB ST-360酶标仪，美国雅培i2000全自动化学发光免疫分析仪。 　　1.4 方法 在ELISA法测定的1025例HBsAg阳性标本中，以吉林省临床检验中心颁发的HBsAg弱阳性质控品（0.2IU/mL）在我室测定的 +2s为标准，选定结果S/CO 5.0的110例弱阳性标本，分别用胶体金法与化学发光法进行鉴别并定量检测HBsAg。所有检测步骤均按仪器及试剂说明书要求操作，标本在用化学发光法检测前均再次用离心机10000转/分离心10分钟后上机，避免体内嗜异性抗体的干扰。 　　1.5统计学处理 采用SPSS 21.0统计软件。计量数值以均数±标准差（ ）表示，组间比较采用t检验，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　由表1可见，在1025例ELISA法检测的HBsAg阳性标本中，有50例弱阳性标本三种方法均为阳性，其中胶体金法显示为强阳性，用美国雅培i2000全自动化学发光免疫分析仪检测结果均250IU/mL，将50例弱阳性标本5倍稀释后再次进行ELISA法检测，S/CO比值在23.25±3.56，显示强阳性；有45例弱阳性标本经胶体金法与化学发光法最后鉴别为假阳性；有15例弱阳性标本经化学发光法最后鉴定为真弱阳性，结果为1.63±1.27IU/mL。ELISA法检测假阳性组与真弱阳性组之间差异无统计学意义（P0.05），假阳性组与后带效应组、真弱阳性与后带效应组之间存在显著性差异（P0.05）。此外，假阳性结果在所有阳性标本中占4.39%（45/1025），在弱阳性标本中占40.91%（45/110）；真弱阳性标本在所有阳性标本中占1.46%（15/1025），在弱阳性标本中占13.64%（15/110）；后带效应标本在所有阳性标本中占4.88%（50/1025），在弱阳性标本中占45.45%（50/110）。 　　3 讨论 　　ELISA法检测HBsAg出现弱阳性结果实际有三种情况，即后带效应、真弱阳性、假阳性。虽然三种结果中后带效应组与其他两组存在显著性差异（△P0.05），因此要对弱阳性结果予以慎重对待。由于抗原抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系，只有抗原抗体浓度比例适当时才出现可见反应，当抗原过剩时称为后带效应，过剩的抗原不能与包被抗体充分结合形成抗原抗体复合物，而是形成小网格复合物，影响显色反应，甚至可出现假阴性[1]。将上述50例后带效应导致的弱