辣椒胞质雄性不育系和保持系生化特性研究.docVIP

辣椒胞质雄性不育系和保持系生化特性研究 　　摘要：对不育系K132A、保持系K132B不同发育阶段花药的生化特性进行比较分析，结果表明：不育系花药不同发育阶段的过氧化物酶、多酚氧化酶、超氧化物歧化酶的比活力明显高于保持系，且呈逐渐增强趋势，而保持系却逐渐减弱。但是，不育系过氧化氢酶的比活力低于保持系，推断由于酶活性的异常变化引起花粉内代谢的失调从而导致败育。为阐明辣椒细胞质雄性不育的败育机理提供理论基础。 　　关键词：辣椒；胞质雄性不育；酶活性 　　中图分类号：S641.3　文献标识码：A　文章编号：1006－6500(2008)02－0050－03 　　 　　植物雄性不育是被子植物中普遍存在的现象。自从1763年Kolreuter首次观察到植物雄性不育现象以来，至今至少已在43科162属320种中发现了植物雄性不育，其中包括辣椒(Capsicumannuum L.)。利用胞质雄性不育(cMs)系进行杂交制种，已成为国际制种业的主要趋势，其可免去人工去雄，节省大量的人力物力，并可以提高杂交种子的纯度，增加农作物的产量。因此，长期以来人们对不育机理未曾终止过探讨。从形态学、细胞学、遗传学、生理生化学及分子生物学方面对植物雄性不育CMS进行了大量的研究，发现雄性不育与作物器官的物质代谢、能量代谢的异常、酶活性的变化有关。本试验对辣椒细胞质雄性不育系和保持系的花蕾的生化特性进行研究，旨在为阐明辣椒的细胞质雄性不育的败育机理提供依据。 　　 　　1　材料和方法 　　 　　1.1材料 　　 　　供试材料为辣椒细胞质雄性不育系K132A和及其相应的保持系K132B，种子来源于天津市农业科学院科润蔬菜研究所。将雄性不育系K132A和保持系K132B用株距55cm、行距65cm的密度各定植60株，田间栽培管理(浇水、施肥、植保等)按一般要求进行。 　　 　　1.2方法 　　酶活性测定分别选用3种不同大小的花蕾，分别为小花蕾(花瓣未露出)、中花蕾(萼片与花瓣等长)和大花蕾(次日开放)。 　　酶样品的制备：取0.1g花药，放入少量石英砂，加pH7.8，0.05mol／L磷酸缓冲液5mL研磨，然后12000r／min，4℃离心20min，取上清液置于冰箱备用。 　　过氧化物酶(POD)测定采用愈创木酚法；多酚氧化酶(PPO)测定采用邻苯二酚法；超氧化物歧化酶(sOD)测定采用氮兰四唑(NBT)法；过氧化氢酶(cAT)的活性测定采用高锰酸钾滴定法。实验设3次重复，测定结果取3次重复的平均值。 　　 　　2　结果与分析 　　 　　从表1可以看出，不同蕾发育时期的不育系花药中过氧化物酶(POD)比活力都极显著高于保持系；在不育系中，大蕾期花药中POD比活力极显著高于中蕾期和小蕾期；在保持系中，大蕾期花药中POD活性极显著低于中蕾期和小蕾期。 　　对于多酚氧化酶(PPO)比活力，不育系与保持系相比较而言，除小蕾期花药中PPO比活力两者差异不显著外，中蕾期和大蕾期都达到极显著差异，且不育系中蕾和大蕾期花药中PPO比活力极显著高于保持系；大蕾期不育系PPO比活力也极显著高于中蕾期和小蕾期；而保持系中蕾期PPO比活力显著低于小蕾和大蕾期。 　　不育系各时期超氧化物歧化酶(sOD)比活力都极显著高于保持系；不育系各时期花药中SOD比活力差异不显著，保持系中各时期花药中SOD比活力差异也不显著。 　　不育系和保持系大蕾期花药中过氧化氢酶(cAT)比活力达显著差异，保持系大蕾期的CAT比活力显著高于不育系。 　　 　　3　结论与讨论 　　 　　本试验结果表明，不同发育阶段不育系花药中过氧化物酶、多酚氧化酶、超氧化物歧化酶的酶比活力明显高于保持系，且呈逐渐增强趋势，保持系逐渐减弱。而不育系中过氧化氢酶比活力低于保持系，说明正是由于酶活性的异常变化才引起花粉内代谢的失调导致不育系败育。该结果与同类研究相一致。例如耿三省等发现，花药中过氧化物酶活性明显高于保持系，而过氧化氢酶活性低于保持系。邓明华等对辣椒细胞质雄性不育系及保持系过氧化物酶活性的分析表明，不育系的POD活性明显高于保持系，且呈持续增强的趋势，而保持系逐渐减弱。戴亮芳等比较分析了过氧化物酶同工酶在幼叶和不同发育时期花蕾宙的表达特征。结果表明，辣椒花蕾中的POD同工酶谱带均比叶片中的更丰富。不育系21A与保持系21B间的酶谱在幼叶和小花蕾中基本无差异，但从中花蕾开始，保持系21B的一些酶带染色开始减弱。在大花蕾和特大花蕾时期，不育系比保持系分别多2条酶带。逯红栋等以9个辣椒雄性不育材料及相应的保持系为试材，测定了花蕾中过氧化物酶、过氧化氢酶的活性和游离脯氨酸的含量。结果表明：雄性不育材料的过氧化物酶活性和多酚氧化酶活性均高于相应的保持系，而过氧化氢酶活性低于