血浆循环microRNA检测及其和冠心病关联性探讨.docVIP

血浆循环microRNA检测及其和冠心病关联性探讨 　　【摘要】 目的 探究血浆循环微小RNA（microRNA）在冠心病患者外周血中的表达水平以及临床意义。方法 60例冠心病患者为观察组， 另选取同期行体检的60例健康人群作为对照组， 比较两组患者血浆中microRNA的表达水平， 并对其差异进行分析。结果 冠心病患者外周血中miRNA-130a、miRNA-126与miRNA-222的表达水平与正常健康人群相比， 差异具有统计学意义（P0.05）。结论 通过测定冠心病患者外周血中miRNA-126与miRNA-222的表达水平能初步确诊患者的病情， 同时还能进一步测定冠状动脉的狭窄情况。 　　【关键词】 冠心病；血浆循环；微小RNA；关联 　　DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.10.033 　　microRNA能抑制蛋白质的翻译过程， 或是直接将蛋白质降解， 并在转录后台中对蛋白质的表达进行调控。血浆中的microRNA由于稳定性较高， 比较容易测得， 同时血浆中的microRNA具有一定的组织特异性， 有望成为一种新型的生物学标志物， 对心血管疾病、肌肉损伤、肿瘤及炎症的诊断具有一定的辅助作用。现有研究发现[1]， microRNA尤其是内皮特异性microRNA对于血管内皮损伤修复调控以及血管新生调控具有重要的作用。本文为探究microRNA在冠心病患者中的表达及意义， 对120例冠心病患者进行了调查， 旨在为今后的microRNA研究提供有力的依据。 　　1 资料与方法 　　1. 1 一般资料 选取本院2014年1月～2014年8月收治的经冠状动脉造影检查确诊的冠心病患者60例为观察组， 另选取同期行体检的60例健康人群作为对照组。对照组男32例， 女28例；年龄24～52岁， 平均年龄（29.2±7.8）岁；经冠状动脉造影检查排除冠心病。观察组男35例， 女25例， 年龄23～54岁， 平均年龄（30.4±7.5）岁。排除先天性心脏病患者， 急性心包炎患者， 急性心肌炎患者， 结缔组织疾病患者， 肺动脉栓塞患者， 自身免疫性疾病患者， 严重肝肾功能不全患者， 恶性肿瘤患者， 急性感染患者， 脑血管疾病患者。观察组患者行冠状动脉造影检查结果提示：前降支、回旋支、左主干、右冠状动脉及其分支的血管直径缩小50%。两组研究对象在性别、年龄等一般资料方面比较差异无统计学意义（P0.05）， 具有可比性。 　　1. 2 microRNA检测方法 所有研究对象均于检测前禁食8 h， 并于清晨入院抽取6 ml外周血， 将其置入EDTA抗凝管内， 并离心10 min， 将上清液取1 ml继续离心10 min， 并将500 μl上清液取出置入新的离心管内。按照Trizol LS试剂的操作说明对各个样本的RNA进行抽取， 并将其置于-80℃内进行集中保存， 行逆转录。使用TaqManmicroRNA Reverse Transcription kit（taqmanmicrorna反转录试剂盒）并按照操作说明在各个样本中提取20 ng总RNA进行逆转录。将TaqMan microRNAssays：miRNA-130a（000454）、miRNA-126（002228）、miRNA-222（002276）作为引物， 将RNU6B（001093）作为内参。在各个样本中提取2 μl转录物， 按照TaqMan universal Master MixⅡ， no UNG（国产TaqMan探针配套的荧光定量预混液）操作说明使用ABI 7500 PCR仪器对TaqMan探针继续拧定量荧光聚合链反应以及PCR双重特异引物扩增技术检测miRNA-130a、miRNA-126、miRNA-222的Ct值， 同时将RNU6B作为内参。 　　1. 3 统计学方法 本次研究数据采用SPSS14.0统计学软件进行数据处理。计量资料用均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料用率（%）表示， 采用χ2检验。P0.05表示差异有统计学意义。 　　2 结果 　　两组研究对象miRNA检测结果比较， 差异有统计学意义（P0.05）。见表1。 　　3 讨论 　　动脉粥样硬化属于慢性进行性的炎性疾病， 造成动脉粥样硬化的始动因素是血管内皮损伤， 所以目前临床对血管内皮损伤修复的关联基因进行了大量的研究。既往研究指出[2]， 内皮特异性microRNA在整个血管新生的过程中起到重要的调控作用， 并分为促进血管新生以及抑制血管新生两种类型。大量研究结果指出miRNA-130a、miRNA-126、miRNA-222在人体的内皮细胞内高度表达， 同时具有明显的特异性[2-4]。国外学者[5]发现miRNA-12