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中药抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜的研究进展 　　摘要：金黄色葡萄球菌是临床感染最为常见的病原菌，抗生素滥用使细菌耐药性增强，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是主要突变株。生物膜的产生进一步降低了抗生素??MRSA菌体的杀伤作用，使该疗法受到更多限制。新的抗MRSA感染药物亟待开发，中药作为天然药物受到更多关注，本文就近年来中药抗MRSA生物膜的研究进行综述，为新药研发提供参考。 　　关键词：中药；生物膜；金黄色葡萄球菌；综述 　　DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.02.035 　　中图分类号：R285 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2017）02-0132-05 　　耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）自1961年首次从临床分离以来，其耐药性迅速在世界范围内传播，成为严重威胁人类生命健康的多重耐药性病原菌。Holland T L等[1]通过文献研究认为，万古霉素和达托霉素是目前治疗MRSA感染的一线抗生素，而万古霉素耐药MRSA的分离使最后一道防线被瓦解[2]。MRSA抗生素耐药机制复杂，主要包括自身基因的突变、外源基因的内化以及抗生素外排泵系统等；自然条件下，在细菌生物被膜这样一个有机体中通常含有多种细菌，这就使不同细菌间得以相互接触，使其成为耐药基因转移的一个途径。Wessam A等[3]通过对血管内MRSA感染的研究发现亚万古霉素抑菌浓度可以诱导MRSA生物被膜的形成，进而降低万古霉素对MRSA菌体的杀菌作用。简言之，生物被膜对抗生素具有极强的抗性，因此，对细菌生物被膜的清除应该摒弃传统的抗生素疗法[4]。中药药源广泛、不良反应少且耐药性低，具有独特优势，从 　　1 研究方法 　　1.1 生物膜体外模型制备 　　生物膜是一个微生物聚集群体，细胞首先固着到基质表面，或个体之间相互连接并固着，进而向胞外分泌多糖及蛋白等基质成分并嵌入其中，在生长、基因表达和蛋白产物方面呈现不同于单个细胞的表型，结构分析表明他们通常呈现柱子或蘑菇样结构[5]。生物膜体外模型的建立是研究生物膜的前提，生物膜的形成受到培养基成分、酸碱度、培养温度、培养时间及细菌接种浓度等多方面的影响。综合国内外文献中采用的方法，生物膜体外模型建立的方法主要有以下2种。 　　动态模型，是指在体外模拟医用导管或水管通路中生物膜的形成，使贴壁微生物连续处于流动的培养基中，避免因封闭培养时间过长导致的营养条件变化，更接近真实的生物膜形成过程。多种装置采用此种原理建立生物膜，Coenye T等[6]在其生物膜模型研究的文献中对多种动态生物膜体外模型进行了阐述，如罗宾斯装置（MRD）、CDC生物膜发生装置等，本文以典型代表管路法和加尔卡里生物膜装置（CBD）法为代表进行阐述。管路法是无菌条件下将一定浓度的菌液接种到载体中，载体通常是导尿管这样的生物活性材料，待细菌贴壁后，通过蠕动泵将新鲜培养液持续不断导入载体中，孔金艳等[7]在对内镜活检管路中生物被膜去除的研究中采用了此种方法，Mirani Z A等[8]在研究苯唑西林对MRSA生物膜的研究中也采用此种方法成功建立MRSA生物膜；CBD是一种建立细菌生物膜的商品化装置，用于检测细菌生物膜对特定药物的敏感性，该装置包括2部分，上部是生物膜形成装置，由含96个小柱的上盖和对应的96孔底板组成，下部是动力装置，可以不断摇动使上盖小柱上的生物膜处于96孔底板的动态培养液中[9]。 　　静态模型是一种封闭模型，是指在体外通过静置培养的方法，使细菌粘附到特定载体上进而形成生物膜的方法，建模过程中没有培养液的流进流出，因此培养环境时刻处于变化中，需要定时更换培养液。目前该种方法主要包括试管法、微孔板法、置片法等。试管法是1982年由Christensen G D等[10]设计的用于检测生物膜形成的方法，将一定浓度和体积的菌液加入无菌试管中，经过特定时间和条件的培养，在试管底部或培养基的表面形成生物膜，如Kaur D C等[11]对伤口感染中MRSA生物膜形成能力和抗生素敏感性的研究中采用了此种方法，该方法简便灵活快捷，至今仍在生物膜研究中发挥作用；微孔板法是生物膜体外研究中最为常用的方法，将一定浓度的菌液接种到微孔板中（通常为96孔培养板），经过特定时间的培养，在微孔板的底部和侧壁会形成生物膜，去除上清培养液中的浮游细菌，即可对留在孔底与侧壁的生物膜进行研究，如Murugan K等[12]对导尿管中细菌生物膜的研究中同时采用了试管法与微孔板法；置片法是在微孔板法的基础上，预先在微孔板中（通常为6、12、24孔培养板）加入无菌硅胶或载玻片等载体，使生物膜在一定面积的载体上生长，成熟生物膜可随内置玻片从微孔板中取出，研究方法更为多样，定量更为精确，如Pereira