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上海市虹口区外的环境霍乱弧菌监测分析 　　（上海市虹口区疾病预防控制中心） 　　摘要: [目的] 了解水体和水产品中霍乱弧菌污染情况。[方法] 2008-2010年按照国家监测方案采集国家监测点水体和水产品, 用增菌、分离培养方法检测O1 群霍乱弧菌和O139 群霍乱弧菌。对分离到的菌株，以PCR方法,对霍乱弧菌菌株进行ctxA毒力基因检测。[结果]3 年合计,从720 份水体中检出6 株霍乱弧菌, 在370 份水产品中未检出霍乱弧菌。6株霍乱弧菌中5株为O1 群霍乱弧菌非流行株（小川型2 株、稻叶型3 株），1株为O139 群霍乱弧菌流行株。3株稻叶型霍乱弧菌不是产毒株，其余均为产毒株。[结论] 2008-2010年上海市虹口区外环境中的霍乱弧菌主要是O1 群非流行株，但仍有ctx阳性产毒株。 　　 　　霍乱是由O1血清群和O139血清群霍乱弧菌引起的急性肠道传染病, 是以发病急、传播快、波及范围广、能引起大流行为特征的国际检疫传染病之一,也是中国法定的甲类传染病之一。霍乱弧菌广泛存在于近海岸的水体和水产品中,其中O1 群和O139 群霍乱弧菌是霍乱的致病菌。上海市虹口区是国家级霍乱监测点，本文对2008-2010年, 上海市虹口区按照国家监测方案采集国家监测点水体和水产品,检测O1 群霍乱弧菌和O139 群霍乱弧菌，了解和掌握本地区水体和水产品霍乱弧菌的污染情况，为霍乱的有效防控提供实验室依据。 　　1材料与方法 　　1.1样品来源 　　2008-2010年,虹口区采集国家监测点水体720份和水产品370份。见表1 　　表12008-2010年样品分类 　　年份 　　水产品 　　水体 　　 　　海鱼 　　河鱼 　　贝壳类 　　虾蟹类 　　合计 　　河水 　　江水 　　污水 　　养殖水 　　合计 　　2008 　　54 　　22 　　31 　　33 　　140 　　96 　　48 　　24 　　72 　　240 　　2009 　　52 　　24 　　24 　　20 　　120 　　96 　　48 　　24 　　72 　　240 　　2010 　　44 　　24 　　32 　　20 　　120 　　96 　　48 　　24 　　72 　　240 　　 　　1.2试剂及仪器 　　碱性蛋白胨水、“双洗”琼脂、O1群霍乱弧菌多价、小川、稻叶、O139群诊断血清购自上海疾控华康科技开发公司；5种抗生素药敏纸片由OXOID生产；M H琼脂由科玛嘉公司生产；氧化酶试剂、革兰染液、ID32E生化反应鉴定条（法国生物梅里埃公司），均在有效期内使用。 　　1.3检测方法 　　按《霍乱防治手册》(第五版)要求,对采集样品进行增菌、培养、鉴定。样品前处理方法:对于鱼类样品采集鳃部和/或肠内容物以无菌操作剪碎后置碱性胨水培养;贝壳、甲壳类样品,如为细小动物,则将样品打碎后,取25～50 g左右,置碱性蛋白胨水中增菌培养;以肛门、鱼鳃及体表涂抹法为主的海(水)产品,并结合整体或部分采集法开展,以无菌棉签涂抹水生动物肛门、鱼鳃及体表,置碱性胨水培养。36℃ ±1℃培养6～8 h后,取菌膜下培养物划线接种“双洗”琼脂及碱性营养琼脂挑取可疑菌落进行革兰染色镜检、氧化酶反应、生化试验, 同时用霍乱弧菌诊断血清做玻片凝集试验。 　　1.4PCR检测 　　PCR检测霍乱弧菌毒力基因ctxA试剂盒由上海宝生科技有限公司提供。扩增条件及具体操作均按试剂说明书进行。 　　1.5药敏试验方法 　　采用WHO推荐的改良K - B纸片法。药敏纸片包括:环丙沙星(CIP) 、诺氟沙星(NOR)、丁胺卡那霉素(AN)、复方新诺明( SXT) 、强力霉素(DO)。实验所用的药敏质控菌株大肠埃希氏菌ATCC25922为上海市疾控中心微生物实验室提供,结果判断按照2008美国国家临床实验室标准化委员会（CLSI)文件规定。 　　2结果 　　2.1检验结果 　　2008-2010年,本区共采集国家监测点水体720份和水产品370份。在720份水体样品中分离检测出6株霍乱弧菌（均来自养殖水），从370 份水产品中未检出霍乱弧菌。6株霍乱弧菌中5株为O1 群霍乱弧菌非流行株（小川型2 株、稻叶型3 株），1株为O139 群霍乱弧菌流行株。3株稻叶型霍乱弧菌不是产毒株，其余均为产毒株。具体结果见表2。 　　表2 6株霍乱弧菌分型结果 　　年份 　　检测养殖水样品数 　　检测阳性数 　　菌株型别 　　2008 　　72 　　1 　　O1群稻叶型 　　2009 　　72 　　2 　　O1群稻叶型 　　2010 　　72 　　3