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乌鳢]基因序列测定ぜ捌湎低撤⒂的关系分析 　　摘要：为了进一步探讨乌鳢（Channa argus）的分类地位及其系统发育关系，通过测定其线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ（CO[QX（Y15]Ⅰ[QX）]）基因部分序列，并从GenBank获取鳢科另外18种鱼类的CO[QX（Y15]Ⅰ[QX）]基因同源序列，以银鲳（Pampus argenteus）为外群，采用非加权配对算术平均法（UPGMA）构建分子系统树。结果表明：（1）支持鳢科分为鳢属和副鳢属；（2）乌鳢与同属的斑鳢（C. maculata）等鱼类的亲缘关系较近。 　　关键词：乌鳢；CO[QX（Y15]Ⅰ[QX）]；序列测定；系统发育 　　中图分类号： S917文献标志码： 　　文章编号：1002-1302（2016）08-0297-03 　　鳢科隶属于鱼纲鲈形目，包括2属29种。其中鳢属26种，分布于中东、南亚和东亚等地；而副鳢属只有3种，主要分布于西非地区[1]。乌鳢（Channa argus）别称北方蛇头鱼、黑鱼、生鱼、乌鱼等，是鳢科鳢属中个体大、生长快、经济价值高的名贵经济鱼类。乌鳢原产于中国、俄罗斯和韩国，国内主要分布于长江和黑龙江流域的大部分地区[2]，通常栖息于水草丛生、底泥细软的静水或微流水中。因乌鳢具有肉质好、味道鲜美、营养丰富等特点，成为我国重要的淡水经济鱼类。长期以来，人们关于乌鳢的形态学、生态学以及人工养殖技术等方面的研究较多，而关于其分子生物学资料则很少，其分类地位和系统发育关系尚存争议。 　　线粒体DNA是真核生物细胞质中的遗传物质，呈母系遗传，具有分子量小、进化速度较快、拷贝数量多等特点，且不易发生重组现象，已成为研究物种起源、进化、分类及种群遗传分化的理想工具。与其他动物一样，线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ（CO[QX（Y15]Ⅰ[QX）]）基因是鱼类线粒体13个蛋白编码基因之一，中度保守，既能保证足够的变异又易于被通用引物扩增，在种群遗传学研究中，可作为属、种系统进化研究的良好标记，常被用于分析亲缘关系较近物种的系统发育以及地理种群之间系统关系的分子工具。已有研究表明，线粒体CO[QX（Y15]Ⅰ[QX）]基因是许多鱼类、昆虫和鸟类等动物分类与鉴别的最适DNA条形码之一[3-5]。 　　本研究对乌鳢线粒体CO[QX（Y15]Ⅰ[QX）]基因进行扩增和测序，并从GenBank下载部分鳢科鱼类的同源序列进行比较研究，初步分析它们之间的亲缘关系和系统进化关系，以期?槲邝?的系统进化及其种质资源的保护和利用进一步提供分子生物学依据。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　乌鳢，购自盐城市农贸市场，活体带回实验室后，用于DNA提取。 　　1.2总DNA提取 　　取约200 mg样品肌肉，采用传统的酚-三氯甲烷方法提取基因组DNA。DNA经沉淀、洗涤并干燥后，溶于100 μL TE缓冲液中，4 ℃冰箱保存备用。 　　1.3PCR扩增和测序 　　1.4数据分析 　　测序结果同GenBank中获得的其他18种鳢科鱼类的线粒体CO[QX（Y15]Ⅰ[QX）]基因序列合并（表1），用Clustal X 1.83软件比对，确定变异位点；用MEGA 4.1软件对序列进行分析，并基于Kimura双参数模型，计算上述不同序列的碱基组成、密码子不同位点的碱基含量，以及相互间的遗传距离等信息；以鲈形目鲳亚目鲳科的银鲳（Pampus argenteus）为外群，用非加权配对算术平均法（UPGMA）构建分子系统树，通过重抽样检验获得系统树分支的置信度（重复次数为1 000次）。 　　2结果与分析 　　2.1CO[QX（Y15]Ⅰ[QX）]基因序列分析 　　通过对乌鳢线粒体总DNA的提取、PCR扩增和序列测定，得到长度为708 bp的基因序列，经BLAST分析比较，证实所得序列为乌鳢CO[QX（Y15]Ⅰ[QX）]基因片段。分析该序列的碱基组成，其中T、C、A、G的含量分别为26.7%、31.1%、23.6%、 18.6%，A+T含量为50.3%，G+C含量为49.7%。从其碱基组成的偏向性看，G含量最低，A+T含量略高于G+C含量，这与其他鱼类线粒体CO[QX（Y15]Ⅰ[QX）]基因同源序列的碱基特点相似[7-10]。 　　2.2遗传距离及系统发育分析 　　遗传距离多用来分析不同群体间的遗传分化程度和群体内的遗传多样性，数值越大，群体内或群体间分化程度越高；数值越小，群体内或群体间分化程度越低。根据Kimura双参数模型得到19种鳢科鱼类之间的遗传距离，其中乌鳢与斑鳢的遗传距离最小，为0.002；乌鳢与月鳢等其他14种同属鱼类之间的遗传距离为0.178～0.241；而乌鳢与同科副鳢属3种鱼类的遗传距离则为0.239～0.253（表2）。可见，