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优质观赏百合品种“索邦”愈伤组织培养的研究 　　摘要： 以观赏百合优质品种“索邦”鳞茎为材料进行愈伤组织培养研究，并成功获得再生植株。结果表明：最佳灭菌方法为75%乙醇30 s+0.1%HgCl2 15 min，污染率仅为30.00%；最佳再生培养基为1/2 MS+2.0 mg/L 2，4-D，平均再生苗数为10.3；再生苗最佳生根培养基为B5+0.10 mg/L NAA，平均生根数为22.7条。 　　关键词： 观赏百合；索邦；愈伤培养；再生培养基；生根培养基；配方 　　中图分类号：S682.2+65.04+3 文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2015）08-0049-02 　　百合是百合科（Liliaccae）百合属（Lilium）植物的总称，因其“数十片相累，状如白莲花，百叶合成”而得名 [1]。百合是最受欢迎鲜切花之一，在世界各地广为栽培，在世界鲜切花市场占有十分重要的地位。百合靠常规的小鳞茎分株方法繁殖，繁殖系数较低，有些种类可用鳞片扦插繁殖，但往往容易腐烂。百合长期靠营养繁殖，容易感染病毒病，而影响百合品质。组织培养快速繁殖技术，能够迅速去除病毒和更新品种，具有较高的经济价值和开发潜力。近年来，中国农业科学院特产研究所引进了一批优质观赏百合品种（木门、索邦、西伯利亚、小太阳、粉冠军、橙色年代等），为适应市场需求，笔者以“索邦”为试材开展了组织培养研究，取得了积极成果。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　观赏百合“索邦”引自北京绿尔农业科技开发有限公司，栽植于中国农业科学院特产研究所左家实验基地。试验时选取生长健康、无病虫害的“索邦”种球鳞片为试验材料。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 外植体消毒 用流动水将鳞茎外泥土冲去后用洗衣粉溶液仔细刷洗剥分后的鳞片，洗净后再用流动水冲洗过夜。接种前用75%乙醇溶液浸洗30 s、无菌水冲洗4～5次后，再用0.1%HgCl2溶液浸洗8、10、15、20 min或用30%84消毒水消毒8、10、15、20 min，最后用无菌水再次冲洗鳞片4～5次。在清洗过程中需要不断震荡摇晃，以确保溶液能充分浸润并充分冲洗材料。将消毒后的百合鳞片放置于1/2 MS+0.1 mg/L 2，4-D培养基中培养观察。 　　1.2.2 培养条件 将消毒灭菌后的鳞片接种于1/2MS固体培养基上，设定培养温度（24±2） ℃、培养湿度50%～60%、光照强度2 000 lx，在光照时长为12 h/d的条件下培养。培养间定期用乳酸灭菌法消毒。 　　1.2.3 愈伤诱导培养基的选择 将鳞片切去四边，切成 0.5 cm×0.5 cm的方块，在生物洁净工作台中分别接种到不添加激素的1/2 MS、MS和B5培养基中。 　　1.2.4 诱导激素的选择 　　1.2.4.1 不同浓度2，4-D对愈伤诱导的影响 在“1.2.3”节的试验基础上，将经过处理后的百合鳞片内侧向上放置于添加不同浓度2，4-D的1/2MS培养基上。2，4-D浓度梯度为0、0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、8.0、10.0 mg/L，每瓶培养基放入1片鳞片，每组处理30瓶，观察并记录愈伤出现时间，60 d后统计诱导率。 　　1.2.4.2 不同浓度毒莠定对愈伤诱导的影响 在“1.2.3”节的试验基础上，将经过处理后的百合鳞片内侧向上放置于添加不同浓度毒莠定的1/2MS培养基上。毒莠定浓度为1 mg/L 和2 mg/L，每瓶培养基放入3片鳞片，每组处理20瓶，并与“1.2.4.1”中最佳结果进行对比。 　　1.2.5 生根培养基的选择 以B5作为基础培养基，添加不同浓度NAA（0、0.01、0.05、0.10 mg/L），每个浓度处理30瓶，40 d后观察生根情况并计算平均生根数。 　　2 结果与分析 　　2.1 “索邦”百合鳞片消毒方法的筛选 　　随着消毒时间的延长，百合鳞片染菌率下降，但消毒时间过长则外植体鳞片成活率降低，愈伤诱导率同时下降。试验结果表明，最佳消毒方法为75%乙醇30 s+0.1%HgCl2 15 min，染菌率为30.00%，诱导率高达63.33%（表1）。 　　2.2 诱导培养基的筛选 　　在表2所示3种培养基中分别接入30个经过消毒处理的鳞片，30 d后观察结果，根据愈伤诱导率和愈伤质量，确定最佳诱导培养基为1/2MS。 　　2.3 不同激素水平对愈伤诱导的影响 　　2.3.1 不同浓度2，4-D对愈伤诱导的影响 在“2.2”节研究结果基础上，以1/2MS作为基础培养基，添加不同浓度 [JP2]2，4-D，观察并记录愈伤出现时间和诱导数量。由表3可知，在不同浓度2，4-D影响下，愈伤组织形态明显不同。当2，4-D 浓度在1.0～2