嗜水气单胞菌毒力因子及病害控制技术的研究进展.docVIP

嗜水气单胞菌毒力因子及病害控制技术的研究进展 　　嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）是革兰氏阴性杆菌，隶属于弧菌科气单胞菌属，广泛存在于淡水、污水及土壤中[1]。其能引发多种水生动物的传染病，导致水产动物出现出血症，给养殖业造成的经济损失尤为严重，是我国淡水养殖鱼类暴发性传染病的主要病原[2]。此外，嗜水气单胞菌还是人、畜、鱼共患的致病微生物，不仅能引起动物的全身性败血症或局部感染，而且也能引起人的急性胃肠炎、败血症及伤口感染、中耳炎、腹膜炎等，因而受到水产学界、兽医学界和医学界的广泛重视[3]。目前，国内外学者在对嗜水气单胞菌毒力因子及病害控制技术方面已取得了一定研究进展，该文对其研究现状进行综述。 　　1致病因子 　　嗜水气单胞菌产生危害的毒力因子主要有外毒素（exotoxin）、胞外蛋白酶（extracelluar protease）、S层蛋白（S-layer protein）、菌毛（fimbriae）、外膜蛋白（out-membrane pro-teins，OMPs）、脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）等[4]。该文将这些毒力因子归纳为外毒素、胞外产物和粘附因子3类，现逐一论述如下。 　　1.1外毒素（exotoxin） 　　1.1.1溶血素（hemolysin）。出血是变温动物感染嗜水气单胞菌的普遍症状[5]。由于在被感染鱼类的体内、体外均可检测到溶血活性，所以溶血素被认为是嗜水气单胞菌的主要毒力因子之一。龚晖等[6]用纯化溶血素分别与1%欧洲鳗鲡血红细胞、1%兔血红细胞、1%羊血红细胞进行溶血特性分析，并利用单克隆抗体进行溶血抑制试验，结果表明嗜水气单胞菌溶血素在单因子条件下与嗜水气单胞菌ECPs的溶血特性存在一定的差异。嗜水气单胞菌ZN1-ECPs中存在多种溶血性毒素，这些毒素对不同宿主的溶血能力存在差异，同一嗜水气单胞菌菌株对不同的宿主起主要作用的溶血性毒素也不同。Goswami et al[7]首次报道致病菌暴露在砷外源物质的情况下会抑制嗜水气单胞菌的溶血性和细胞毒性。 　　1.1.2气溶素（aerolysin）。aer毒素是嗜水气单胞菌的重要的毒力因子。它是一个分子量约为52.25 kD的单个分子的多肽，具有溶血性、细胞毒性、肠毒性，决定嗜水气单胞菌致病性的强弱。朱建萍等[8]从三角帆蚌体内分离出10株嗜水气单胞菌分离株并进行PCR法检测，结果证实aer基因携带率为50%。经过对症状进行对比后发现，分离自感染症状严重的三角帆蚌体内的5株嗜水气单胞菌均携带气aer基因，分离自轻度感染的三角帆蚌体内的5株嗜水气单胞菌未检测到aer基因，这也说明aer是嗜水气单胞菌的重要致病因子。 　　1.1.3肠毒素（cytolyticenterotoxin）。肠毒素是一种分子量为15 kD的蛋白质。用鼠和兔的肠绊试验检测其腹泻性毒性，其在兔的肠绊不引起黏膜损伤，但会导致液体积聚，所聚积液体的电解质内容和霍乱作用的结果相似。其可增加肠细胞分泌，但是未发现增加cGMP分泌。肠道内的嗜水气单胞菌导致的腹泻性病，容易为抗菌素抑制。研究表明，动物在大量感染嗜水气单胞菌时，肠道内肠毒素量大，与细胞不可逆结合，使体液大量损失，导致死亡[9]。 　　1.2胞外产物 　　1.2.1胞外蛋白酶（extracelluar protease）。嗜水气单胞菌的胞外蛋白酶也是主要的致病因子之一，能够直接引起宿主组织损伤，有利于细菌的入侵和营养供给，其存在与否直接与菌株毒力相关。储卫华等[10]证明胞外蛋白酶具有致病性。但Cascón et al[11]分别克隆了嗜水气单胞菌的胞外淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶及磷脂酶，认为就其致病性而言，胞外蛋白酶有的具有直接致病性，有的则不具有直接致病性。引起这种差异的原因可能是蛋白酶不仅可以协同其他毒力因子共同作用机体，而且还具有活化其他致病因子的作用。嗜水气单胞菌分泌的外毒素是以无活性的前提形式存在的，必须经过蛋白酶作用将前体C末端的蛋白降解才能发挥生物学活性。因此，有些蛋白酶虽然没有直接的致病性，但其可以借助其他的毒力因子发挥作用。一般认为热稳定金属蛋白酶有直接的致病性，而热敏感丝氨酸蛋白酶则没有直接的致病性。 　　1.2.2磷脂酶基因（Phospholipase gene）。Merino et al[12]从嗜水气单胞菌AH-3克隆测序了磷脂酶A1基因pla和磷脂酶C基因plc。2个克隆基因pSK-PLA（pla）和pSK-PLC（plc）的测序结果分别为2 602、2 868 bp，pSK-PLA含有一个ORF（176-2591），编码805个氨基酸，分子量82.7 kD；pSK-PLC含有一个ORF（885-2691），编码572个氨基酸，分子量为6