安宫牛黄丸对脑外伤后血脑屏障损伤及脑水肿作用机制的研究.doc

安宫牛黄丸对脑外伤后血脑屏障损伤及脑水肿作用机制的研究 国际医药卫生导报2010年第16卷第17期IMHGN,September2010,Vo1.16No.I7 安宫牛黄丸对脑外伤后血脑屏障损伤 及脑水肿作用机制的研究 谢裕华朱文锐 【摘要】目的系统地分析安宫牛黄丸对脑外伤后血脑屏障损伤及脑水肿的影响,阐明 其作用的分子机制,揭示其开窍醒脑的机理,为临床合理应用及进一步开发利用其治疗脑外伤 后所致脑水肿提供依据.方法以Feeney法建立大鼠闭合性脑损伤模型,同绕脑外伤性脑水肿 中血脑屏障损伤的主要环节,探讨安宫牛黄丸对脑损伤后脑含水量,BBB通透性以及神经细胞突 触数量的影响,系统地分析安宫牛黄丸对血脑屏障损伤及脑水肿的影响,阐明其作用的分子机 制,揭示其开窍醒脑的机理.结果与假手术组比较,模型组损伤侧脑含水量及脑皮质EB含量 明显增加(尸lt;0.O1).与模型组比较,安宫牛黄丸组损伤侧脑含水量及脑皮质EB含量明显降低 (尸lt;0.05).与假手术组比较,模型组损伤侧脑皮质电镜下突触密度显着性降低(尸lt;O.O1),与 模型组比较,安宫牛黄丸组损伤侧脑皮质电镜下突触密度明显增加(Jplt;0.05).结论安宫牛 黄丸可减轻脑水肿,保护血脑屏障,降低毛细血管通透性,提高脑组织对缺血,缺氧的耐受性, 从而保护脑组织. 【关键词】安宫牛黄丸;血脑屏障;脑水肿;实验研究 血脑屏障(BBB)结构和功能的变化与脑水 肿的发生和发展密切相关.影响BBB通透性是多 环节的,主要与脑微血管内皮细胞损伤,细胞外 基质破坏和胶质细胞水通道异常开放有关.而所 有研究均表明人们可以通过药物,基因调控手段 及其他方法改善BBB的通透性来达到治疗目的. 随着神经科学和分子生物学的迅猛发展,人们越 来越重视对脑水肿BBB损害分子机制的探索,试 图取得更大的突破,为防治外伤脑水肿开辟新的 途径.安宫牛黄丸的开窍醒脑作用受到历代医学 家的重视,其在治疗脑外伤后所致神昏谵语等临 床症状有确切的疗效,其开发的价值显而易见; 而现代研究中临床较多局限于对其疗效的报道, 对该方确切的疗效细节(如有效成分及作用靶点 等)尚缺乏后续的深入研究.因此我们认为研究 安宫牛黄丸对外伤后脑损伤保护作用的机理时, 既要从BBB损伤环节系统研究安宫牛黄丸对外 伤后脑水肿病理生理机制的干预作用,又要在分 子水平进行重点攻关,力争有所创新,为中医提 D【J1:1O.3760/cma.issn.1007-l245.2010.17.005 基金项目:广东省科技厅(73024) 作者单位:5l0405广州中医药大学第一附属医院 供一种保护BBB的中药打开新局面. 脑损伤后因血脑屏障损害,继发脑水肿是其 死亡的主要原因是之一….我们经过多年临床研 究发现,安宫牛黄丸能明显提高脑外伤抢救成功 率.本研究参照最新国内外相关资料,采用科学 准确的试验方法,以Feeney法建立大鼠闭合性脑 损伤模型,围绕脑外伤性脑水肿中血脑屏障损伤 的主要环节,探讨安宫牛黄丸对脑损伤后脑含水 量,BBB通透性以及神经细胞突触数量的影响, 系统地分析安宫牛黄丸对血脑屏障损伤及脑水肿 的影响,阐明其作用的分子机制,揭示其开窍醒 脑的机理,为临床合理应用以及名优中成药的二 次开发提供科学的依据. 1资料与方法 1.1动物清洁级sD大鼠40只,雌雄各半,体 质量250～300g,广东省医学实验动物中心提供, 合格证号:(粤)2009—0002. 1.2分组采用简单随机化进行分组,把这40 只清洁级SD大鼠随机分为4组.a:假手术组(进 行开颅手术不进行重物打击);b:模型组(予以 体积分数为1%的吐温溶液);c:安宫牛黄丸组; d:尼莫通组;每组10只. 1.3模型制备用Feeney法符合临床研究的大 3077 国际医药卫生导报201O年第】6卷第】7期IMHGN,September2010,Vo1.16No.J7 鼠闭合性脑损伤模型,是一种简便易控制及可定 量的经典方法.Feeney法撞击装置由支架,套管, 砝码和脚板四部分组成,其中套管每隔1CIll钻 一 小孑L,以助排出管内空气,减少阻力.砝码重 20g,脚板为直径4mm,高1nlm的圆柱体.清 洁级sD大鼠,体重250～300g,大鼠术前均禁食 8h,禁水2h,10%水合氯醛腹腔内注射麻醉后, 俯卧固定于木板上.右侧颅顶部备皮,常规消毒 铺巾,选取右侧颅顶旁正中切口,长约3cm,分 离皮肤,切开骨膜,向两侧分离,露出约0.8cm 的颅骨.以前囟后1.5mm处为中心钻孔,蚊式钳 扩大骨窗至4mm(注意保护矢状窦和硬脑膜,骨 窗不能太大,以防脚板倾斜),置人脚板.以20 cm高度,重为40g的砝码自由落体进行一次撞击 (即撞击能量为800g?啪).骨蜡密封颅骨,缝合