酶联免疫吸附法检测马传染性贫血病毒核衣壳蛋白聚合.pdf

摘要 摘要 一些蛋白质合成出来即具有生物学活性，但对于另一些蛋白质来说，翻译 完成后要经过不同方式的加工修饰才能成为活性形式，二聚化或多聚化就是其 中常见的加工方式。研究蛋白质聚合的常用方法有凝胶过滤层析法、非变性凝 胶电泳法和动态光散射技术等。此外，研究蛋白．蛋白相互作用的方法，如酵母 down等，也可以用来鉴定蛋白质的聚合。这些方法 双杂交、免疫共沉淀、pull infectiousanemia 应用广泛，各有利弊。马传染性贫血病毒(equine virus，EIAV) 与人免疫缺陷病毒(human immunodeficiencyvirus．HIV)同属于反转录病毒科 与病毒基因组结合，形成核酸一蛋白复合体，在病毒生活周期的各个阶段发挥 重要作用。核衣壳蛋白具有典型的CCHC型锌指结构，具有这种结构的蛋白易 于发生同源或异源聚合。 immunosorbent 本文对酶联免疫吸附法(enzyme．1inked 了改良，并将之应用于检测马传染性贫血病毒核衣壳蛋白的聚合。首先构建了 白进行了纯化，得到了纯度较高的蛋白。然后将改良的酶联免疫吸附法用于检 测NC的聚合：将NC包被于多孔板底，用带FLAG标签的NC与之结合，然后 依次加入抗．FLAG的单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的二抗以及HRP的底物， 终止反应后于450 am波长下读取吸收值以检测蛋白是否发生聚合。本文还对 NC聚合的特异性、剂量依赖效应和影响因素等进行了评价。利用改良的酶联免 疫吸附法，我们检测到马传染性贫血病毒的NC可发生特异性聚合，且聚合程度 在一定范围内呈现剂量依赖效应，此外，我们还发现核酸能够影响NC的聚合， 而FLAG标签的位置则对聚合没有影响。这些结果为研究NC与核酸的相互作 用机制积累了数据。用改良的酶联免疫吸附法检测蛋白质的聚合具有特异性好、 灵敏度高和可定量等特点。 关键词：酶联免疫吸附法，蛋白质聚合，核衣壳蛋白，马传染性贫血病毒 Abstract Abstract Some arefunctionalsoonafter are othersneed proteins theytranslated，whereas t0be modifiedor to their function． post-translational gain biological polymerized Thereare methodsto dimerizationor many studyprotein includemolecularsieve gel chromatography,nativepolyacrylamideelectrophoresis， and forthe of dynamiclightscattering．Moreover,methodsinvestigation as interaction，such protein-protein yeasttwo-hybrid and alsobeutilizedto dimerizationor