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天台乌药叶SOD活力测定的研究 　　[摘要] 目的：测定天台乌药叶SOD活力；比较不同时期采摘的天台乌药叶SOD活力；建立天台乌药叶SOD活力测定方法。方法：采用邻苯三酚自氧化法，并设计了相应的改良条件。结果： 12月采摘的风干冷藏乌药叶SOD活力相对较高，为60.411 U/g；5月份采摘的新鲜乌药叶SOD含量相对较低，为44.943 U/g。结论： 天台乌药叶中含有SOD，含量与采摘季节和保存方法有关。本文可为天台乌药叶的深入研究和开发提供参考。 　　[关键词] 乌药；乌药叶；天台乌药；超氧化物歧化酶（SOD）；邻苯三酚 　　[中图分类号] R931.4[文献标识码]B[文章编号]1673-7210（2007）12（c）-156-03 　　 　　超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，简称SOD），于1969年由Fridovich和Mccord从牛红细胞中发现并正式命名。SOD是一类广泛存在于生物体内的金属酶，在生命体的自我保护系统中起着极为重要的作用，在免疫系统中也有重要的功能[1]。SOD能够催化超氧阴离子自由基发生歧化反应，平衡机体内的氧自由基，已经成为化学及生物化学研究领域中热门的研究课题。作为生物体内超氧阴离子自由基的清除剂，SOD在防辐射、抗衰老、消炎、抑制肿瘤和癌症、自身免疫病治疗等方面显示出独特的功能，在医学[2]、食品[3]、化妆品[4,5]等领域得到越来越多的应用。 　　樟科植物乌药Lindera aggregate (Sims)Koterm.主要生长于中国浙江、湖南等省，日本的纪伊半岛也有分布。乌药为常用中药材，具有顺气止痛、温肾散寒的作用，历代方书多用其根，对其叶的记述极少。张朝凤等[6,7]研究了乌药叶的抗菌、抗感染成分，并分离出了黄酮类成分。梁向明等[8]研究了乌药叶茶在健康人体环境下的抗氧化作用，并得出饮用乌药叶茶可使机体的抗氧化能力得以明显提高的结论。本文对天台乌药叶中超氧化物歧化酶的活性进行了初步测定，主要以中华人民共和国国家标准《保健食品中超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定》[9]方法即修改的Marklund方法作为基本方法，并参考有关文献的经验进行改良，探索建立了提取方法、活力计算方法等，为天台乌药叶的进一步开发提供了依据。 　　 　　1 仪器、试药与方法 　　 　　1.1 仪器与试药 　　岛津UV-2550紫外可见分光光度计；Eppendorf 5810R高速冷冻离心机。 　　天台乌药叶（采自浙江省天台县三洲乡下屋村，经陈方标先生鉴定）；标准SOD（购自北京化学试剂公司，由牛血细胞中提取，8 000 U/mg）；所用试剂均购自北京化工厂，分析纯。 　　1.2 方法 　　1.2.1 试剂的配制 　　1.2.1.1 50 mmol/L pH=7.8 KH2PO4-K2HPO4 缓冲溶液的配制准确称取KH2PO4 6.804 5 g和K2HPO4?3H2O 11.411 g，分别定容至100 ml（Ⅰ）；从（Ⅰ）中分别准确量取KH2PO4溶液10.4 ml、K2HPO4溶液89.6 ml，混合定容至1 000 ml，摇匀，所得溶液为50 mmol/L pH=7.8的KH2PO4-K2HPO4缓冲溶液。 　　1.2.1.2 0.1 mol/L HCl和10 mmol/L HCl的配制用移液管量取分析纯盐酸（36%~38%）8.47 ml，用蒸馏水定容至1 000 ml。准确量取0.1 mol/L HCl 20 ml，定容至200 ml。 　　1.2.1.3 A液：0.1mol/LTris-HCl缓冲溶液（内含1 mmol/L EDTA?2Na）的配制称取Tris(三羟甲基氨基甲烷，分子量=121.14，纯度为99.9%以上) 2.422 8 g和EDTA(二乙三胺五乙酸，分子量=372.24，纯度≥99.5%)74.448 mg，溶于62.4 ml的0.1 mol/L HCl，中并用蒸馏水定容至100 ml，用pH计测定，调节pH至（8.20±0.01）。 　　1.2.1.4 B液：4.5 mmol/L的邻苯三酚溶液的配制称取邻苯三酚（PR，分子量=126.11）56.7 mg，用10 mmol/L HCl定容至100 ml。使用前配制，置4℃冰箱中备用。 　　1.2.2 天台乌药叶SOD的提取 　　1.2.2.1 天台乌药叶采摘处理包括： ①5月份上午采摘的新鲜树叶；②5月份下午采摘的新鲜树叶；③12月份采摘，低温冷藏至次年5月的树叶；④12月份采摘，在16℃温度下，自然风干保存至次年5月的树叶。 　　1.2.2.2天台乌药叶的初提取 准确称量“1.2.2.1”所示的四种天台乌药叶各100 g（均折算至鲜重），分别提取。自来水洗