广西野生高良姜提取液抗菌的作用的研究.docVIP

广西野生高良姜提取液抗菌的作用的研究 　　【关键词】 高良姜；提取液；抗菌作用 　　中图分类号：R285.1 文献标识码：B DOI：10.3969/j.issn2015.05.032 　　近年来，随着合成及半合成抗菌药物的增多和广泛使用，细菌耐药性问题日趋严重，各种耐药性细菌引发院内感染等疾病的发病率不断增长，长期以来西药对耐药一直束手无策[1]。高良姜（Alpinia officinarumHance）性辛、热，归脾、胃经，具有温胃、止呕、散寒止痛之功效[2]，现代药理学研究表明，高良姜还具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抗胃肠道出血、抗溃疡和胃黏膜保护等作用[3]。本研究利用野生高良姜提取液，研究其抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的情况，为高良姜的抗菌作用提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 菌种的收集 　　本次实验收集2014年5月～2015年4月右江民族医学院附属医院从临床分离的菌株，采集的标本来自临床感染患者咽拭子、痰、气管冲洗物、血液、脓液、粪便等标本。所有菌株经VITEK微生物分析仪鉴定确认。收集到的金黄色葡萄球菌25株，绿脓杆菌15株，白色念珠菌16株，不动杆菌15株，大肠杆菌12株。 　　1.2 药物 　　本试验所用高良姜来自广西百色周边的山地，经乙醇提取后使用。 　　1.3 高良姜药液的制备 　　高良姜水提液的提取：高良姜切成碎片后加水，用10倍的水煎煮3次，每次1小时，浓缩至1 g/ml。高良姜乙醇液提取：取高良姜碎片，用75%乙醇回流提取3次，每次1小时，浓缩至1 g/ml。上述药液都配制成0.5 g/ml，0.25 g/ml，0.125 g/ml，0.0625 g/ml四种浓度备用。 　　1.4 KB药敏纸片法 　　将纯培养后的菌种接种于普通培养基中，37℃培养24 h，用接种环挑取形态相似菌落4～5个，接种于5 ml的MH肉汤中，37℃培养3 h，用生理盐水配制成0.5麦氏/比浊标准，即含1～2108 CFU/ml的菌悬液。无菌操作下将空白药敏纸片（6 mm）放到不同浓度的高良姜药液中，浸泡1 h。用棉签取上述菌悬液涂布到MH平板中，再将含有药样的药敏纸片滤水，微干后铺在平板中，37℃培养24 h后观察结果。 　　1.5 琼脂稀释法测最低抑菌浓度（MIC） 　　采用美国CLS标准琼脂稀释法测定各种中药提取液对所采集菌种的最低抑菌浓度（minimum inbibition concentration，MIC）[4]。本次实验高良姜测定浓度范围为1～4 g/ml。各浓度的高良姜分别加入经过高压灭菌后在50℃水浴的MH琼脂中，充分混匀后倾倒入平皿，琼脂厚度为5～6 mm。制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再以1∶10稀释，用微量移液器吸取制备好的菌液2 μL接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104 CFU，形成5～8 mm的菌斑。接种好后置37℃培养箱24 h后将平板置于暗色、无反光的物体表面判断结果，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。 　　2 结 果 　　2.1 KB药敏纸片法检测高良姜提取液的抗菌作用 　　结果显示：高良姜醇提液和水提液对金黄色葡萄球菌均敏感，对铜绿假单胞菌、白假丝酵母菌、不动杆菌、大肠埃希菌不敏感。见表1。 　　2.2 琼脂稀释法检测结果 　　高良姜醇提液和水提液浓度为0.0625 g/ml，0.125 g/ml，0.25 g/ml时对金黄色葡萄球菌均耐药，浓度为0.5 g/ml时对金黄色葡萄球菌均敏感，结果表明，高良姜醇提液和水提液对金黄色葡萄球菌的MIC均为0.5 g/ml。 　　3 讨 论 　　高良姜，别名小良姜，又名徐闻良姜，药学名Alpiniaofficinarum Hance，为姜科植物，是一种热带多年生长的山姜，属食药兼用的植物资源。追溯高良姜的历史，高良姜始载于《名医别录》，因出于古高凉郡（今广东省湛江、茂名一带）故名高凉姜，后因谐音而讹称为高良姜。高良姜在我国古代的诸多药典如《本草纲目》及《中国药典》均有记载。而在《图经本草》中则对高良姜有更详细的记载：“春生茎叶如姜苗而大，高一、二尺许，花红紫色如山姜”。高良姜对人体造血机能有显著促进作用，据《本草纲目》记载，“其性甘辣、清凉，除烦热、利津小便，通三焦团壅、塞气抗寒、散气之功效，且明目驱瘴。”其味辛，性温，有温胃散寒、行气、消食止痛之功效[5～7]。 　　近20年来，随着合成及半合成抗菌药物的增多和广泛使用，细菌耐药性问题日趋严重，各种耐药性细菌引发院内感染等现象不断增多，长期以来西药对此一直束手无策，而高良姜是研究开发新的抗菌药物的理想资源，但目前有关研究较少，并且还仅仅处于对粗提物的研究阶段，为明确其中的活性成分，有待进一步深入