干扰MTDH基因表达抑制宫颈癌Hela细胞增殖及侵袭的研究.docVIP

干扰MTDH基因表达抑制宫颈癌Hela细胞增殖及侵袭的研究 　　【摘 要】 目的：研究干扰MTDH基因表达对宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法：构建MTDH shRNA表达质粒，将其转染Hela细胞并设置相应的对照组，Western-blot检测各组细胞中MTDH、VEGF-A、E-Cadherin蛋白表达情况；同时MTT法检测各组细胞增殖情况；Transwell检测各组细胞侵袭能力。结果：与对照组相比，MTDH干扰组Hela细胞中MTDH、VEGF-A蛋白表达明显下降，E-Cadherin蛋白表达显著上升。MTDH干扰组Hela细胞增殖受到明显抑制，且细胞侵袭能力显著下降。结论：干扰Hela细胞中MTDH基因表达能够下调VEGF-A表达并增强E-Cadherin的表达，从而抑制Hela细胞增殖及侵袭。 　　【关键词】 MTDH RNA干扰 宫颈癌 细胞增殖 细胞侵袭 　　宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤，对宫颈癌的基因治疗是值得探索的综合治疗手段之一，理想靶点的选择及有效的干预手段是基因治疗的重要基础。MTDH即metadherin，中文名为异黏蛋白，是近年来发现的一个比较新的癌基因。根据文献报道[1]，MTDH在宫颈癌、乳腺癌等多种肿瘤组织中高表达，显示其可能与多种肿瘤的发生、发展密切相关。研究显示，MTDH过度表达能够诱导肿瘤细胞异常增殖，提高肿瘤细胞的细胞侵袭能力，增强肿瘤细胞对化疗药物的耐药性，从而促进肿瘤的发展。因此MTDH可能是在很多肿瘤中进行基因治疗的理想靶点。 　　目前国内外已有研究者通过下调MTDH表达抑制肝癌、乳腺癌等肿瘤的发生及发展[2，3]，但将MTDH作为基因治疗靶点应用于宫颈癌治疗的相关报道很少。在宫颈癌细胞中抑制MTDH表达后，是否会对肿瘤细胞的增殖和侵袭能力造成影响，其具体作用机制如何，是值得研究的课题。因此本课题构建了MTDH shRNA质粒，利用其下调宫颈癌Hela细胞中MTDH表达，观察其对Hela细胞增殖和侵袭能力的影响，并对其中可能的作用机制进行了研究。 　　1 材料与试剂 　　MTDH shRNA表达质粒（pLV-MTDH-sh）及相应的对照质粒（pLV-shNC）购自长沙赢润生物技术有限公司。Hela细胞购自中科院上海细胞库。胎牛血清、DMEM培养基购自Gibco。Lip2000转染试剂购自Invitrogen。MTDH抗体、VEGF-A抗体、E-Cadherin抗体均购自CST。β-actin内参抗体、MTT检测试剂盒均购自长沙赢润生物技术有限公司。 　　2 方法 　　2.1 细胞培养及转染 　　用T25细胞培养瓶培养两瓶Hela细胞，利用Lip2000转染试剂将pLV-MTDH-sh、pLV-shNC质粒分别转染至Hela细胞中，48h后收细胞。 　　2.2 Western-blot检测 　　提取2.1中获得的各组细胞总蛋白，常规Western-blot方法检测各组细胞中MTDH、VEGF-A、E-Cadherin蛋白表达情况，以β-actin作为内参。 　　2.3 MTT检测细胞增殖 　　将Hela细胞分为两组，分别转染pLV-MTDH-sh、pLV-shNC质粒，于转染后24h、48h、72h用MTT检测试剂盒检测各组细胞增殖情况。 　　2.4 Transwell检测细胞侵袭能力 　　将Hela细胞分为两组，分别转染pLV-MTDH-sh、pLV-shNC质粒，48h后用Transwell法检测各组细胞侵袭能力。 　　3 结果 　　3.1 Western-blot检测MTDH、VEGF-A、E-Cadherin蛋白表达 　　Western-blot检测对照组及MTDH干扰组Hela细胞中MTDH、VEGF-A、E-Cadherin蛋白表达情况，结果显示与对照组相比，MTDH干扰组Hela细胞中MTDH、VEGF-A蛋白表达明显下降，而E-Cadherin蛋白表达显著上升（图1），差异有统计学意义（P0.05）。 　　3.2 干扰MTDH基因表达对Hela细胞增殖的影响 　　MTT法检测对照组及MTDH干扰组Hela细胞增殖情况，结果显示与对照组相比，MTDH干扰组Hela细胞增殖受到显著抑制，细胞增殖抑制率最高可达12.23%（图2），差异具有统计学意义（P0.05）。 　　3.3 干扰MTDH基因表达对Hela细胞侵袭能力的影响 　　Transwell法检测对照组及MTDH干扰组Hela细胞侵袭能力，结果显示MTDH干扰组Hela细胞侵袭能力下降为对照组的49.3%（图3），改变明显，差异有统计学意义（P0.05）。 　　4 讨论 　　MTDH是近年来新发现的一个癌基因，在乳腺癌、宫颈癌等多种肿瘤中高表达，如