蝉拟青霉产透明质酸的提取工艺及其性质研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

贵州大 贵州大学 2009 届硕士学位论文 蝉拟青霉产透明质酸的分离纯化及其性质研究 I II 3 结果和分析 25 3.1 标准曲线的建立 25 3.2 透明质酸发酵液处理方法研究 26 3.2.1 透明质酸酶的失活条件研究 26 3.2.2 残留菌体、蛋白质去除方法研究 27 3.3 透明质酸粗品分离 31 HYPERLINK \l _bookmark0 第三章 蝉拟青霉产透明质酸的纯化工艺研究 32 HYPERLINK \l _bookmark1 1 材料 32 HYPERLINK \l _bookmark1 1.1 材料 32 HYPERLINK \l _bookmark1 2 方法 32 HYPERLINK \l _bookmark2 2.1 检测方法 32 HYPERLINK \l _bookmark3 2.2 纯化方法 33 2.2.1 溴化十六烷基吡啶沉淀法 33 2.2.2 离子交换层析纯化法 34 3 结果与分析 35 2.1 标准曲线 35 3.2 溴化十六烷基吡啶法与离子交换层析纯化法对比 35 3.3 离子交换层析纯化研究 36 3.3.1 洗脱剂浓度的影响 36 3.3.2 洗脱剂流速的影响 38 3.3.3 洗脱剂 PH 值的影响 39 HYPERLINK \l _bookmark4 第四章 蝉拟青霉产透明质酸的部分理化性质研究 40 HYPERLINK \l _bookmark4 1 材料 40 HYPERLINK \l _bookmark4 1.1 材料 40 2 方法 40 2.1 透明质酸的物理和化学性质 40 2.2 透明质酸纯化样品杂质鉴定 41 3 结果和分析 43 3.1 透明质酸的物理和化学性质 43 3.2 透明质酸杂质测定 46 I III 第五章 讨 论 51 1 对蝉拟青霉产透明质酸粗分离研究讨论 51 1.1 透明质酸酶失活的讨论 51 1.2 残留菌体、蛋白质等杂质去除的讨论 51 1.3 硅藻土处理条件讨论 52 1.4 透明质酸粗品讨论 52 2 对透明质酸的纯化研究的讨论 53 3 对蝉拟青霉产透明质酸精品的部分理化性质检验研究的讨论 53 4 存在的问题 54 5 进一步研究的方向 55 致 谢 56 参考文献 57 PAGE PAGE 1 蝉拟青霉产透明质酸的分离纯化及其性质研究 中文摘要. 透明质酸（Hyaluronic acid, HA）又名玻璃酸，因其独特的分子结构和理化性质而具有高粘弹 性和强力的保水作用，极具实用价值。本试验重点针对蝉拟青霉发酵液中提取透明质酸的提取工 艺进行优化研究，使用比较几种常用的发酵液处理方法，得出蝉拟青霉发酵产透明质酸的优化提 取工艺，找到一条能提高其提取率及保持高分子量，降低蛋白质杂质含量，简单易行的提取工艺 路线。并对最后纯化精品进行较为详细地理化性质检验，主要试验结果如下： 1 粗分离过程中发酵液透明质酸酶的去除条件，经过对酸加热方法进行研究得到在加入 pH4.5 为三 氯乙酸的最佳温度条件选择为 60℃，其分子量损失率为 0.5%。 2 粗分离过程中蛋白质，菌体的去除条件，经过对氯仿萃取，超声波，硅藻土过滤三种方法比较 研究后得出，硅藻土方法效果最好，透明质酸收率为 80.11%，蛋白质去除率 89.57%，残留菌体密 度为 0.15，分子量损失率为 5.92%。 3 对硅藻土过滤影响条件中的等因素进行了单因子试验，选取滤饼厚度、稀释倍数、过滤温度和 真空度四个最佳单因子进行L9(34)正交试验。通过极差分析得较优组合，确定其最佳工艺条件组合 真空度为0.07Mpa、硅藻土敷设厚度为0.9cm、稀释倍数为1倍、温度为20℃。验证实验表明，其透 明质酸收率稳定在83%。 4 对透明质酸粗品采用溴化十六烷基吡啶沉淀法及离子交换层析纯化法，得出蛋白质含量方面离 子交换层析纯化法为 0.098%，优于溴化十六烷基吡啶沉淀法 0.41%。针对离子交换层析纯化影响 较大的洗脱机的流速、浓度、pH 等条件进行研究。得出最佳洗脱条件为浓度为 0.5mol/L 氯化钠溶 液、pH7.0、流速 1.0mL/min。 5 透明质酸精品理化性质检验，白色粉末带少许纤维，可溶于水，不溶于丙酮、醇、醚，分子量约 1000kd；蛋白质含量为 0.077%；总糖含量 8