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产油毛霉菌的筛选及其油脂发酵工艺优化-新能源科学与工程专业论文
独创性声明
本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。尽我所知,除文中已经标明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或 集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体,均已在 文中以明确方式标明。本人完全意识到,本声明的法律结果由本人承担。
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日期: 年 月 日
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日期: 年 月 日 日期: 年 月 日
华
华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文
I
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摘 要
生物柴油具有可生物降解、低毒、低排放特性,是最有前景的化石能源替代燃 料,但原料油供应不足成为限制生物柴油发展的瓶颈。微生物油脂是生物柴油的潜 在理想原料油,本论文拟从自然界中筛选油脂高产真菌,并对其油脂发酵工艺进行 优化,取得的主要研究结果如下:
(1) 从牧场土壤筛选获得一株油脂含量为30.2%的真菌,其脂肪酸组份主要为油 酸(46.26%)、棕榈酸(22.58%)、γ-亚麻酸(13.68%)和亚油酸(6.68%),与植物油脂肪酸 组成相似,碱法制备生物柴油得率89.6%,且其生物柴油特性指标基本符合国际生物 柴油生产标准,表明该菌株可作为原料油生产生物柴油。
(2) 根据形态学、生理生化特征及18S rDNA序列分析,对筛得的菌株进行分类 鉴定。结果表明,该菌株的形态和生理特征与毛霉属真菌相似,且其18S rDNA 序列 与Mucor sp. EA 2010b stain ERRL的18S rDNA 序列相似度为99%,因此,将其归属 于毛霉,并命名为Mucor sp. RBB 1-5。
(3) 采用单因子实验和响应面分析优化了Mucor sp. RBB 1-5的油脂发酵工艺,发 现蛋白胨较酵母粉更有利于油脂积累,其最佳培养基配方为:葡萄糖103.32 g/L,蛋 白胨3.21 g/L,豆粕粉蛋白浓度3.29 g/L,KNO3 3.0 g/L,Na2HPO4 2.0 g/L,MgSO4·7H2O 1.0 g/L;最佳培养条件为:初始pH 6.0,装液量50 mL/250 mL,温度28℃,培养时间
5 d。在优化发酵条件下,油脂产量达10.38 g/L,相比未优化之前提高2.15倍。
(4) 研究了蛋白胨和酵母粉对油脂发酵的影响机制。通过分析氮源对三羧酸循环 (TCA)途径中苹果酸酶(ME)活性和戊糖磷酸(PP)途径中葡萄糖-6磷酸脱氢酶(G6PDH) 活性的影响,探讨氮源对油脂发酵的影响机制。苹果酸酶(ME) 酶活与油脂变化趋势 一致,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)活性与油脂变化无明显相关性,蛋白胨为氮源 时ME酶活性高于酵母粉组,表明蛋白胨主要通过影响TCA途径,增强ME活性,进 而增加还原力NADPH的供应来提高油脂产量。
关键词: Mucor sp. RBB 1-5;油脂合成;筛选;鉴定;工艺优化;生物柴油
II
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Abstract
Biodiesel had been one of most promising substitute of fossile energy because of its biodegradation, reduced toxicity and a lower emission profile. Short supply of raw oil had been a bottleneck for biodiesel production. Microbial lipid could be a potential and ideal raw material for biodiesel production. In this thesis, a potential lipid producer for biodiesel production was screened and identified. Then the optimal lipid fermentation technology was determined. Finally the source of NADPH was investigated through analyzing the effects of yeast ex
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