产甘油葡萄糖苷蓝藻的培养优化及产物分离-水产养殖专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 独 创 性 声 明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。 尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰 写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过 的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并 表示了谢意。 研究生签名： 时间： 年 月 日 关于论文使用授权的说明 本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送 交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手 段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学 位论文的全部或部分内容。 研究生签名： 时间： 年 月 日 导 师 签 名 ： 时间： 年 月 日 青岛农业 青岛农业大学硕士学位论文 摘要 产甘油葡萄糖苷蓝藻的培养优化及产物分离 摘 要 由于蓝藻的光合能力以及它们清晰的遗传背景，研究人员通过基因改造的手段来改 造蓝藻，使其能够生产不同的生物燃料。然而，目前蓝藻生产生物燃料的成本与传统化 石燃料相比，仍然不占优势。因此，更可行的策略是利用蓝藻来生产其他高附加值的生 物活性化合物，如甘油葡萄糖苷。 甘油葡萄糖苷（Glucosylglycerol, GG），是由一些受到胁迫的微生物合成的渗透保 护物质。由于甘油葡萄糖苷具有稳定蛋白质结构和激活细胞内保护酶的能力，因此可以 被用做蛋白稳定剂以及化妆品添加剂。日本一些传统发酵食品中，也被发现含有生物活 性化合物甘油葡萄糖苷。另外，甘油葡萄糖苷可以作为渗透保护物质在异养细菌（如假 单胞菌、寡养单胞菌）和蓝藻（如集胞藻 PCC 6803、聚球藻 PCC 7002）细胞中进行从 头合成和积累。但是，目前国际上对于甘油葡萄糖苷的获得主要是通过化学合成以及体 外酶法合成，而通过蓝藻来生产甘油葡萄糖苷只有少数报道。本研究就是用基因工程改 造的集胞藻 PCC 6803 突变株 ΔggtCDΔggpR 来生产甘油葡萄糖苷，一方面通过培养优化 来提高甘油葡萄糖苷的产量、降低生产成本，另一方面探索建立能够从蓝藻培养液中分 离浓缩甘油葡萄糖苷的方法，为在不久的将来实现甘油葡萄糖苷产业化应用奠定基础。 本研究主要有以下内容及结果： 第一：为了延长产甘油葡萄糖苷藻株的培养周期，以生产更多的甘油葡萄糖苷溶液， 我们选择半连续培养方式；为了减少半连续培养过程中频繁离心带来的成本增加，我们 在培养之前先利用凝胶封装技术对产甘油葡萄糖苷蓝藻进行了封装。分别利用琼脂和海 藻酸钙将藻细胞封装，在加盐 BG11 培养基中进行光照半连续培养，结果显示琼脂糖凝 胶封装培养可以延长 ΔggtCDΔggpR 藻株的培养周期，进行 7 个周期，有效延长了培养 时间，提高了产物收率，降低了成本。 第二：前期实验显示补加 BG11 培养基营养盐，藻细胞的生长及甘油葡萄糖苷的产 量都有所提高。因此对产甘油葡萄糖苷蓝藻的培养基进行了优化，进行了单因子实验以 及 Plackett-Burman 实验设计，以期能找到 BG11 培养液中显著影响甘油葡萄糖苷的因素， 来降低生产成本。结果显示母液 1 对甘油葡萄糖苷产量提高有显著影响。 第三：利用培养实验中得到了大量的甘油葡萄糖苷溶液，用来探索甘油葡萄糖苷的 分离方法，获得较为纯净的甘油葡萄糖苷样品。在本实验中，我们比较了多种大孔吸附 I 树脂 XAD 系列（XAD-4、XAD-16、XAD-1600、XAD1180、XAD-761、XAD-7HP）、 AB-8、D101，以及葡聚糖凝胶 G-15、粉末活性炭对甘油葡萄糖苷的吸附分离效果。结 果显示，粉末活性炭对甘油葡萄糖苷的吸附分离效果较好，从而对粉末活性炭的吸附分 离进行了优化。由结果可知，活性炭用量 5 g，乙醇洗脱浓度 50%时，得到最佳的甘油 葡萄糖苷吸附率为 83.87%，洗脱率为 76.57%。并且又利用纳滤膜对甘油葡萄糖苷溶液 进行了分离实验，实验结果显示通过纳滤膜后，甘油葡萄糖苷产物得到浓缩，88%的甘 油和 90.2%的盐可以除去。 关键词：蓝藻；甘油葡萄糖苷；凝胶封装；培养基优化；吸附分离 II 青岛农业 青岛农业大学硕士学位论文 ABSTRACT Cultivation Optimization of the Glucosylglycerol-producing Cyanobacterium and the Product Separation ABSTRACT Because of the photosynthetic capacity and the clear genetic background, cyanobacteria us