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草莓灰霉病菌生防细菌的筛选及其抗菌机制的研究-微生物学专业论文
独 创 声 明
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学位论文作者签名: 导师签字:
签字日期:201 年 月 日 签字日期:201 年 月 日
山东师范大学硕士学位论文
山东师范大学硕士学位论文
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目 录
中文摘要 I
Abstract III
第一章文献综述 1
引言 1
1.1 草莓灰霉病及其防治措施 1
1.1.1 草莓灰霉病害 2
1.1.2 化学防治及其存在问题 3
1.1.3 生物防治草莓灰霉病的现状 4
1.2 灰霉病拮抗细菌防治机理的研究进展 4
1.2.1 拮抗细菌的种类 5
1.2.2 拮抗细菌的生防机理研究 6
1.3 本研究的背景及目的意义 9
1.3.1 研究背景 9
1.3.2 研究的目的意义 9
第二章 草莓灰霉病生防细菌的分离与鉴定 10
引言 10
2.1 材料与方法 10
2.1.1 实验样品 10
2.1.2 培养基 11
2.1.3 靶标病原菌 12
2.1.4 引物 12
2.1.5 主要仪器和设备 12
2.1.6 草莓内生细菌的分离和拮抗菌的筛选 12
2.1.7 草莓根际土壤中细菌的分离及拮抗菌的筛选 13
2.1.8 其它植株中内生细菌的分离及拮抗菌的筛选 14
2.1.9 生防菌株的抑菌谱测定 14
2.1.10 生防菌株形态、生理生化及分子鉴定 14
2.2 结果与分析 16
2.2.1 草莓内生细菌的分离及拮抗菌的筛选 16
2.2.2 草莓根际土壤中细菌的分离及拮抗菌的筛选 18
2.2.3 其它植株中内生细菌的分离及拮抗菌的筛选 18
2.2.4 生防菌株的抑菌谱测定 20
2.2.5 生防菌株形态、生理生化及分子鉴定 21
2.3 本章小结 23
2.3.1 内生细菌的筛选 23
2.3.2 生防细菌的鉴定 24
第三章 生防细菌 SL6 抑菌物质的初探及培养条件的优化 25
引言 25
3.1 材料与方法 25
3.1.1 供试菌株及靶标病原菌 25
3.1.2 培养基 25
3.1.3 主要试剂及仪器 26
HYPERLINK \l _TOC_250004 3.1.4 生防菌株 SL6 培养滤液对草莓灰霉病拮抗作用测定 26
i
3.1.5 生防机制的研究 27
HYPERLINK \l _TOC_250003 3.1.6 生防细菌 SL6 培养条件的优化 27
3.2 结果与分析 29
HYPERLINK \l _TOC_250002 3.2.1 生防菌株 SL6 培养滤液菌丝生长的影响 29
HYPERLINK \l _TOC_250001 3.2.2 生防菌株 SL6 培养滤液对菌丝形态破坏作用的电镜观察 29
3.2.3 培养滤液中蛋白成分的抑菌作用 30
3.2.4 培养滤液中脂溶性成分的抑菌作用 30
HYPERLINK \l _TOC_250000 3.2.5 不同培养基对 SL6 菌株产生的拮抗活性影响 31
ii
ii
I
I
3.2.6 发酵液单因素对抑菌效果的影响 31
3.2.7 发酵液最佳优化条件 35
3.3 本章小结 36
第四章 生防细菌 SL6 抗菌蛋白的纯化及田间试验 37
引言 37
4.1 材料与方法 37
4.1.1 供试菌株及靶标病原菌 37
4.1.2 培养基 37
4.1.3 主要试剂及仪器 38
4.1.4 抗菌粗蛋白的特性分析 38
4.1.5 抗菌蛋白的分离与纯化 39
4.1.6 田间试验 44
4.2 结果与分析 45
4.2.1 不同浓度硫酸铵的盐析效果 45
4.2.2 抗菌粗蛋白的特性 46
4.2.3 DEAE Sepharose Fast Flow 离子交换层析 48
4.2.4 活性蛋白初探 49
4.2.5 SD
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